重組蛋白/細胞因子的實驗操作和選擇方法
在我們進行抗體制備、ELISA、藥物研究、免疫實驗、細胞培養、晶體結構分析等實驗時，免不了要和重組蛋白打交道。MCE 重組蛋白產品涵蓋超過 2000 種不同功能的重組蛋白，具有批次間一致性，優異的活性以及極低的內毒素水平等特性，可用于多種不同領域的生物學研究。
小白：師兄師兄，我要買 human GM-CSF 用于體外細胞培養，網上一查，發現有好多種相似產品，看得我頭都大了。
師兄：這里面涉及的門道可多了，不僅要考慮到實驗目的，還要考慮產品的相關特性。
萌 Cece：重組蛋白/細胞因子選擇，有幾個重點選擇標準，我給你們列出來了：
選擇因素 1：研究目的
在選擇產品前，要先清楚自己的實驗目的，根據實驗目的，我們就能排除一些干擾因素。
選擇因素 2：產品特性
1、活性數據 (Biological Activity)
1）ED50半數有效量 (Median effective dose, ED50) 在量反應中指能引起 50% 最大反應強度的藥量，在質反應中指引起 50% 實驗對象出現陽性反應時的藥量。ED50 值越小，作用越強。
2）比活力 (Specific Activity)在特定條件下，單位重量 (mg) 蛋白質所具有的酶活力單位數。對于同一種酶來說，比活力越大，酶的純度越高。
MCE 官網會顯示產品相關活性數據，各批次數據可能稍有差別。
2、內毒素水平 (Endotoxin Level)
革蘭氏陰性菌的菌體中存在的毒性物質的總稱，它是一種典型的熱原，哪怕是皮克級 (10-12g) 或納克級 (10-9g) 內毒素進入血液，也會引發各種生物反應。
在選擇重組蛋白產品時，內毒素水平也是參考的一大要素。特別是重組蛋白應用于細胞/動物實驗實驗、藥物研究時，內毒素水平會間接影響實驗結果。
綜合以上兩個因素，我們就能從眾多產品中選出 C 位啦！畢竟，我們靠的是實力。
小白：師兄，我買的細胞因子，就這么一點點粉末，該怎么處理啊，可不能浪費一丟丟。
師兄：市面上大部分重組蛋白是凍干粉形式，這也是方便蛋白保存和運輸。買來的重組蛋白凍干粉可要謹慎溶解。
萌 Cece：說到這里，那本萌 Cece 就講講怎么更好地溶解重組蛋白吧~
第一步：開蓋前需離心
實驗操作：10,000-12,000 rpm 離心 30 s。凍干粉在運輸過程中會粘附于管壁或管蓋，在開蓋使用之前，需先離心，將凍干粉收集于管底。MCE 保證每管產品的蛋白總量達到標示含量。
第二步：產品復溶
實驗操作：向凍干粉中加入復溶 buffer/無菌水，用槍頭輕輕吹打混勻，重懸至濃度不低于 100 μg/mL。PS：將凍干粉稀釋到指定的濃度范圍，有利于維持重組蛋白良好的穩定性。
第三步：產品保存
實驗操作：
1) 實驗周期＜1 周：復溶后的重組蛋白液體可放在 2-8℃ 保存；
2) 實驗周期＞1 周/復溶的產品一次性用不完：將已重懸的蛋白溶液用含載體蛋白 (0.1% BSA，5% HAS，10% FBS，5% 海藻糖) 的溶液稀釋，分裝凍存。復溶后，-20℃ 可保存至少三個月，推薦 -80℃ 長期保存，以獲得更穩定性能的產品。
載體蛋白可以預先封閉管壁上蛋白結合位點，使重組蛋白末不會粘附于管壁。在分裝凍存前，用含載體蛋白的溶液稀釋可以保證低濃度的重組蛋白仍然維持較高的穩定性。
小白：原來小小的一個產品里隱藏了這么多學問，漲知識啦！那有沒有其他需要注意的，我一并記下來。
師兄：之前只是知其然，現在是知其所以然。
萌 Cece：還有一些實驗小細節哦，細胞因子特別注意不能影響其活性，以下幾點也要注意。
1、溶解過程中切記不要采用渦旋震蕩輔助溶解
我們習慣在固體溶解時采用渦旋震蕩助溶。但對于細胞因子來說，具備一定的空間結構會使其活性更佳。正確實驗操作是用移液器槍頭輕輕吹打混勻或者上下顛倒混勻。若無法做到充分溶解，可以將復溶產品至于水平搖床低速搖一段時間或 4℃ 靜置 2 h 以上。
2、稀釋用的含載體蛋白的溶液不能用水來進行實驗
特別注意的是，稀釋用的含載體蛋白的溶液指的是指有一定緩沖能力、pH 值為中性的溶液，如 PBS、培養液 DMEM 或者 RPMI1640 等。不能用水來代替。
3、重組蛋白活力值與計算方法
MCE 的重組蛋白產品并未采用 WHO 設定的標準來測定活力值，以上計算公式并不適用于 “International Units” 和 “ED50” 的轉換關系，需要采用國際標準品對比相同實驗獲得該重組蛋白的 IU 值。
現 MCE “重”逢開學季活動正在進行中，重組蛋白 40% OFF，全線產品實付 5000 元，還可免費申請 DIY 專屬 T 恤！點擊下面圖片立即 get 活動詳情。
產品選擇篇
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師兄：這里面涉及的門道可多了，不僅要考慮到實驗目的，還要考慮產品的相關特性。
萌 Cece：重組蛋白/細胞因子選擇，有幾個重點選擇標準，我給你們列出來了：
選擇因素 1：研究目的
在選擇產品前，要先清楚自己的實驗目的，根據實驗目的，我們就能排除一些干擾因素。
選擇因素 2：產品特性
1、活性數據 (Biological Activity)
1）ED50半數有效量 (Median effective dose, ED50) 在量反應中指能引起 50% 最大反應強度的藥量，在質反應中指引起 50% 實驗對象出現陽性反應時的藥量。ED50 值越小，作用越強。
2）比活力 (Specific Activity)在特定條件下，單位重量 (mg) 蛋白質所具有的酶活力單位數。對于同一種酶來說，比活力越大，酶的純度越高。
MCE 官網會顯示產品相關活性數據，各批次數據可能稍有差別。
2、內毒素水平 (Endotoxin Level)
革蘭氏陰性菌的菌體中存在的毒性物質的總稱，它是一種典型的熱原，哪怕是皮克級 (10-12g) 或納克級 (10-9g) 內毒素進入血液，也會引發各種生物反應。
在選擇重組蛋白產品時，內毒素水平也是參考的一大要素。特別是重組蛋白應用于細胞/動物實驗實驗、藥物研究時，內毒素水平會間接影響實驗結果。
綜合以上兩個因素，我們就能從眾多產品中選出 C 位啦！畢竟，我們靠的是實力。
產品溶解篇
小白：師兄，我買的細胞因子，就這么一點點粉末，該怎么處理啊，可不能浪費一丟丟。
師兄：市面上大部分重組蛋白是凍干粉形式，這也是方便蛋白保存和運輸。買來的重組蛋白凍干粉可要謹慎溶解。
萌 Cece：說到這里，那本萌 Cece 就講講怎么更好地溶解重組蛋白吧~
第一步：開蓋前需離心
實驗操作：10,000-12,000 rpm 離心 30 s。凍干粉在運輸過程中會粘附于管壁或管蓋，在開蓋使用之前，需先離心，將凍干粉收集于管底。MCE 保證每管產品的蛋白總量達到標示含量。
第二步：產品復溶
實驗操作：向凍干粉中加入復溶 buffer/無菌水，用槍頭輕輕吹打混勻，重懸至濃度不低于 100 μg/mL。PS：將凍干粉稀釋到指定的濃度范圍，有利于維持重組蛋白良好的穩定性。
第三步：產品保存
實驗操作：
1) 實驗周期＜1 周：復溶后的重組蛋白液體可放在 2-8℃ 保存；
2) 實驗周期＞1 周/復溶的產品一次性用不完：將已重懸的蛋白溶液用含載體蛋白 (0.1% BSA，5% HAS，10% FBS，5% 海藻糖) 的溶液稀釋，分裝凍存。復溶后，-20℃ 可保存至少三個月，推薦 -80℃ 長期保存，以獲得更穩定性能的產品。
載體蛋白可以預先封閉管壁上蛋白結合位點，使重組蛋白末不會粘附于管壁。在分裝凍存前，用含載體蛋白的溶液稀釋可以保證低濃度的重組蛋白仍然維持較高的穩定性。
產品細節篇
小白：原來小小的一個產品里隱藏了這么多學問，漲知識啦！那有沒有其他需要注意的，我一并記下來。
師兄：之前只是知其然，現在是知其所以然。
萌 Cece：還有一些實驗小細節哦，細胞因子特別注意不能影響其活性，以下幾點也要注意。
1、溶解過程中切記不要采用渦旋震蕩輔助溶解
我們習慣在固體溶解時采用渦旋震蕩助溶。但對于細胞因子來說，具備一定的空間結構會使其活性更佳。正確實驗操作是用移液器槍頭輕輕吹打混勻或者上下顛倒混勻。若無法做到充分溶解，可以將復溶產品至于水平搖床低速搖一段時間或 4℃ 靜置 2 h 以上。
2、稀釋用的含載體蛋白的溶液不能用水來進行實驗
特別注意的是，稀釋用的含載體蛋白的溶液指的是指有一定緩沖能力、pH 值為中性的溶液，如 PBS、培養液 DMEM 或者 RPMI1640 等。不能用水來代替。
3、重組蛋白活力值與計算方法
MCE 的重組蛋白產品并未采用 WHO 設定的標準來測定活力值，以上計算公式并不適用于 “International Units” 和 “ED50” 的轉換關系，需要采用國際標準品對比相同實驗獲得該重組蛋白的 IU 值。
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