穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株是指經(jīng)合適的藥物濃度進(jìn)行藥物篩選后,得到外源DNA穩(wěn)定整合到宿主染色體,并可以長(zhǎng)時(shí)間表達(dá)外源目的基因的細(xì)胞。
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實(shí)驗(yàn)原理
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株是指經(jīng)合適的藥物濃度進(jìn)行藥物篩選后,得到外源DNA穩(wěn)定整合到宿主染色體,并可以長(zhǎng)時(shí)間表達(dá)外源目的基因的細(xì)胞。穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株彌補(bǔ)了瞬時(shí)感染(或轉(zhuǎn)染)實(shí)驗(yàn)中外源基因表達(dá)時(shí)間短的缺陷,便于長(zhǎng)期觀察。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的篩選需根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物,常用的抗性篩選有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)、滅稻瘟素(Blasticidin)等。若實(shí)驗(yàn)需求構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,我們建議通過(guò)慢病毒感染細(xì)胞進(jìn)行藥物篩選的方法,此方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染可以更加有效的將外源基因整合入基因組,且整合位點(diǎn)處于轉(zhuǎn)錄相對(duì)活躍的區(qū)域,從而獲得更加高效表達(dá)外源基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)流程
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