根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物,最常用的真核表達(dá)基因載體的標(biāo)志物有潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin
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通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法及電穿孔等基因轉(zhuǎn)染技術(shù),將靶基因被導(dǎo)入細(xì)胞后,一般在轉(zhuǎn)染后48小時(shí),靶基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>48小時(shí)后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)(即瞬時(shí)轉(zhuǎn)染)。如若建立穩(wěn)定的細(xì)胞系,則可對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行篩選,根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物,最常用的真核表達(dá)基因載體的標(biāo)志物有潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。篩選后可以得到穩(wěn)定表達(dá)外源基因的細(xì)胞克隆,這就是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA整合到染色體上,使得轉(zhuǎn)染的細(xì)胞可長(zhǎng)期表達(dá)。
(1)服務(wù)流程
1)篩選濃度測(cè)定:以10-14天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
2)細(xì)胞接種:轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞,各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長(zhǎng)率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞應(yīng)達(dá)到60%-80%覆蓋。
3)細(xì)胞轉(zhuǎn)染
4)抗生素篩選
5)鑒定篩選結(jié)果
(2)您需要提供
1)構(gòu)建好的外源基因載體
2)待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系(1*106個(gè)細(xì)胞,可傳代,倍增時(shí)間小于48小時(shí))
3)關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)條件的說(shuō)明
(3)我們提供
構(gòu)建好的穩(wěn)定細(xì)胞系及相關(guān)的外源基因表達(dá)分析