在RNAi研究中,測定敲除效率時,通過轉染控制的最適化,可以獲得高敲除效果。因此,為了將RNAi研究成功導入,需要對客戶希望的細胞進行轉染效率的最適化工作。
(1)服務流程
1)對需要用于轉染的細胞進行細胞培養;
2)優化轉染條件:在熒光顯微鏡下檢測Fluorescent Oligo或可表達GFP的干擾載體的熒光強度,評估轉染效率
3)為靶基因設計一組siRNA雙鏈或干擾載體
4)采用熒光定量RT-PCR或免疫蛋白印跡評估轉染后某一時間點靶基因的RNA水平或蛋白水平的變化
5)可利用抗生素來篩選穩定表達shRNA或miRNA的細胞株
(2)您需要提供:
1)選擇的細胞系和詳細的細胞培養的操作步驟
2)選擇的靶基因cDNA的序列號
3)抗體(如果需要Western blot檢測)
(3)我們提供:
1)轉染效率分析
2)Knockdown分析,包括熒光定量PCR檢測報告、Western Blot圖片等