miRNA載體構(gòu)建及病毒包裝

miRNA是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的具有調(diào)控功能的內(nèi)源性非編碼RNA，大小約20~25個(gè)核苷酸。

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實(shí)驗(yàn)原理

miRNA是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的具有調(diào)控功能的內(nèi)源性非編碼RNA，大小約20~25個(gè)核苷酸。我們根據(jù)成熟miRNA序列信息，合成含有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體miRNA連接至含側(cè)翼序列的表達(dá)載體中，將其轉(zhuǎn)染/病毒包裝感染進(jìn)入細(xì)胞后，由II型啟動(dòng)子（CMV）啟動(dòng)表達(dá)，經(jīng)核酸酶的剪切加工，組裝RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體，通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式識(shí)別靶mRNA，并根據(jù)互補(bǔ)程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。
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