人體腫瘤β-catenin 突變巢式分析試劑盒產(chǎn)品說明書

主要用途

人體腫瘤β-catenin 突變巢式分析試劑是一種旨在方便、快速地進行各種人體腫瘤細胞或組織中與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的信號傳導(dǎo)因子―β-連環(huán)蛋白（β-catenin）的外顯子3（exon 3）熱點區(qū)域（hot spot）的基因突變檢測的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的一步法熱啟動高保真PCR和直接測序檢測體系。靈敏度、特異性、穩(wěn)定性優(yōu)勢明顯。擴增產(chǎn)量高，測序效果好，突變發(fā)現(xiàn)易。產(chǎn)品即到即用，無核酶污染，性能穩(wěn)定，操作方便迅速，質(zhì)量保證。

技術(shù)背景

β-連環(huán)蛋白（β-Cadherin-associated protein；CTNNB1；β-catenin；β-cat）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種信號傳導(dǎo)分子。它是一種多功能的蛋白質(zhì)，在細胞間粘附和Wnt信號傳導(dǎo)中起作用。其在腫瘤發(fā)病機制中的作用是目前研究的熱點之一。它具有23.2 Kb DNA堿基，16外顯子，3362 mRNA堿基，781氨基酸，92KD 蛋白質(zhì)。其中外顯子3的熱點區(qū)域是GSK-3b（glycogen synthase kinase -3b）磷酸化的重要位置。該區(qū)域的基因突變是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的原因之一。檢測β-catenin 外顯子3的熱點區(qū)域基因突變可篩查易患結(jié)腸癌、肝癌、卵巢癌、黑色素瘤等的高危人群。 

產(chǎn)品內(nèi)容

擴增液（Reagent A）   2毫升

補充液（Reagent B） 1毫升

酶解液（Reagent C）    200微升

引物F液（Reagent D）    100微升

引物R液（Reagent E）    100微升

產(chǎn)品說明書    1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，有效保證6個月

用戶自備

DNA純化試劑盒：用于各種樣品DNA的純化

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

PCR儀：用于樣品擴增

PCR管或平板：用于PCR反應(yīng)的容器

測序試劑盒：用于測序前的產(chǎn)物處理

實驗步驟

• 將擴增液（Reagent A）和補充液（Reagent B）從－20℃冰箱里取出
• 置入冰槽里直至融化
• 針對一個樣本，每次移出17微升擴增液（Reagent A）到PCR管或平板
• 加入1至3微升用戶待測的DNA樣品
• 再加入5至7微升補充液（Reagent B）（總量為25微升）
• 即刻進行PCR反應(yīng)：

• 反應(yīng)完畢后，移出10微升反應(yīng)液到新的1.5毫升離心管
• 加入2微升酶解液（Reagent C）
• 放進37℃恒溫水槽孵育1小時
• 放進95℃水槽孵育30分鐘
• 在室溫下靜置15分鐘
• 分別移出2微升反應(yīng)液到2個不同的新的1.5毫升離心管
• 加入1微升引物F液（Reagent D）到其中一個1.5毫升離心管，作好標記
• 加入1微升引物R液（Reagent E）到另一個1.5毫升離心管，作好標記
• 進行后續(xù)的直接測序反應(yīng)
• 突變分析序列：

注意事項

• 本產(chǎn)品為100次操作

• 操作時，須戴手套
• 建議整個操作在4℃下進行

• 使用時，避免污染母液
• 根據(jù)用戶PCR儀的性能，決定是否加入礦物油（Mineral Oil）
• 試劑避免反復(fù)凍融
• 附件提供β-catenin的DNA和氨基酸的完整序列
• 本公司提供系列人體腫瘤標志基因檢測分析產(chǎn)品 

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無核酶污染
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定反應(yīng)產(chǎn)量高

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