免疫熒光細胞流式儀基礎檢測試劑盒（無一抗和二抗）產品說明書（中文版）

主要用途

免疫熒光細胞流式儀基礎檢測試劑（無一抗和二抗）是一種旨在使用優化基礎條件包括胞膜通透、非特異性封閉等處理，使目標一抗以及熒光染料綴合物二抗的應用效果增強，通過雙重參數細胞流式儀定量分析細胞樣品中蛋白表達狀況的的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。主要適用于各種活體細胞（動物、人體等）的目標蛋白表達水平的測定。產品嚴格無菌，即到即用，反應敏感，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

免疫熒光技術（immunofluorescence）是一種融合免疫學、生物化學和流式細胞儀技術為一體的標記分析技術，通過使用抗體抗原反應和示蹤熒光染料結合，定量分析目標抗原蛋白分子。免疫熒光技術分為直接法和間接法：前者使用示蹤熒光染料直接標記在特定抗體上，直接檢測目標抗原；后者使用第一抗體先于抗原進行免疫反應，然后運用示蹤熒光染料標記的第二抗體與第一抗原抗體復合物反應，又稱為三明治方法，來檢測目標抗原。在去垢劑通透處理后，使抗體容易接觸到胞漿或細胞器的抗原。借助山羊血清和牛血清白蛋白的作用，降低樣品非特異性背景噪雜，顯示反應的特異性。流式細胞術（FLOW CYTOMETRY）是七十年代發展起來的集計算機、激光、流體力學、細胞化學、細胞免疫學為一體的高科學技術。

產品內容

清理液（Reagent A）    300毫升

固著液（Reagent B）    100毫升

封阻液（Reagent C）    300毫升

一抗液（Reagent D）      5毫升（自備）

二抗液（Reagent E）      5毫升（自備）

復染液（Reagent F）    25毫升

產品說明書 1份

保存方式

保存固著液（Reagent B）、封阻液（Reagent C）和復染液（Reagent F）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；復染液（Reagent F），避免光照；有效保證6月

用戶自備

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于細胞脫離

完全細胞培養液（12052）：用于中和胰蛋白酶的處理

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

2毫升離心管：用于細胞染色的容器

（微型）臺式離心機：用于樣品操作

細胞流式儀：用于細胞熒光分析

實驗步驟

實驗開始前，將－20℃冰箱里試劑盒中的試劑置入冰槽里融化。然后進行下列操作：

• 準備1個6孔細胞培養板的細胞（1 X 10⁶細胞/孔）
• 小心抽去培養液
• 加入2毫升清理液（Reagent A），鋪滿培養孔表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 加入1毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液
• 放進37℃細胞培養箱孵育1分鐘
• 加入3毫升用戶自備的完全細胞培養液
• 移取細胞混勻液到15毫升錐形離心管（注意：懸浮細胞由此步驟開始）
• 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為400g（或1500rpm，例如EPPENDORF 5810R）
• 小心抽去上清液
• 加入2毫升清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
• （選擇步驟）細胞計數
• 轉移到2毫升離心管
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
• 小心抽去上清液
• 加入2毫升－20℃預冷的固著液（Reagent B），混勻細胞顆粒群
• 置于冰槽里孵育15分鐘或過夜
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D） 
• 小心抽去上清液
• 加入2毫升清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D） 
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升封阻液（Reagent C），上下抽吸混勻
• 室溫下孵育30分鐘
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
• 小心抽去上清液
• 用手指輕彈管底，使細胞顆粒松動
• 加入100微升一抗液（Reagent D），充分混勻
• 室溫下孵育45分鐘
• 加入1毫升封阻液（Reagent C），混勻
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
• 小心抽去上清液
• 重復實驗步驟30至32一次
• 用手指輕彈管底，使細胞顆粒松動
• 加入100微升二抗液（Reagent E），充分混勻
• 室溫下孵育45分鐘，避免光照
• 加入1毫升封阻液（Reagent C），混勻
• 渦旋震蕩3秒
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為800g（或3000rpm，例如EPPENDORF 5415D）
• 小心抽去上清液
• 重復實驗步驟37至40二次
•  加入500微升復染液（Reagent F），用槍頭充分混勻
• 移入到細胞流式儀專用測試管（可放進4℃冰箱里待測），避免光照
• 即刻進行細胞流式儀分析：波長488nm氬離子激光器，觀察50000個細胞以上
• 建立地形圖或散點圖以及直方圖分析

注意事項

• 本產品為50次操作量
• 操作時，須戴手套，以防污染
• 孵育時，避免光照
• 用戶注意一抗和二抗的用量，避免過量使用；抗體稀釋建議使用封阻液（Reagent C）
• 建議細胞染色完成后，即刻進行細胞流式儀分析。如果放進4℃冰箱里待測，不要超過3天
• 細胞流式儀分析前，須混勻內容物
• 細胞檢測量不得少于10000個
• 建議測試陽性或陰性對照組
• 檢測時，須彌補電子補償，以去除雙重參數的光譜重疊
• 告知流式儀技術員有關細胞類型
• 本公司提供系列蛋白表達分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定熒光清晰

上海一基實業有限公司多年專供：ELISA試劑盒，PCR恒溫熒光測試盒、朗道校準品、校準質控品、標準品|對照品、抗體|抗原、生物試劑、動物血清、人類CDNA、基因組DNA、MicroRNA產品、總RNA產品、人原代細胞裂解液、生物試劑、高端試劑等系列產品。如需產品詳細說明等物理性質信息請聯系客服為您查詢！質量保證，價格優惠，是國內生物試劑權威的供應商之一，專業經銷生物科學領域的品牌試劑：Sigma試劑、ASROS試劑、AIFA試劑、alding試劑、Fisher試劑、日本MBL試劑、美國劍橋CIL氘代試劑、ATCC菌株等品牌產品。擁有齊全的生產和檢測設備，實施嚴格的管理制度和完善的質量保證體系，為廣大客戶提供全面的技術支持和完善的售后服務。歡迎來電咨詢!