RNA熒光（RiboGreen）定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

RNA熒光（RiboGreen）定量檢測試劑是一種旨在通過使用RiboGreen熒光染料與樣品中RNA的高度結(jié)合而產(chǎn)生熒光信號來精確定量樣品中RNA含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種分子生物學(xué)實驗，例如體外轉(zhuǎn)錄RNA、Northern Bolt、S1核酸酶檢測、RNA酶保護檢測、cDNA庫制備、逆轉(zhuǎn)錄PCR和差異顯示PCR中RNA含量分析。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，高度敏感。

技術(shù)背景

作為RNA染色劑之一的RiboGreen熒光染料與樣品中RNA，包括rRNA、mRNA等結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號。RiboGreen技術(shù)可以檢測到低達1納克RNA的變化。RNA的微量增加引起熒光信號強度（Intensity）或相對熒光單位（RFU）的顯著增加。其自發(fā)熒光（Autofluorescence）忽略不計，重復(fù)性標準差異（Standard Deviation）低，不受樣品化學(xué)成分的干擾。

產(chǎn)品內(nèi)容

染色液（Reagent A）     15微升

稀釋液（Reagent B）      5毫升

標準液（Reagent C）         200微升

產(chǎn)品說明書                          1份

保存方式

保存染色液（Reagent A）和標準液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融；其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent A）避免光照，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

200微升1厘米光徑比色皿或黑色96孔板：用于熒光分析的容器

熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于熒光定量分析

實驗步驟

• 測定準備

• 準備好待測樣品，置于冰槽里
• 設(shè)定好熒光分光光度儀：激發(fā)波長485±10nm，散發(fā)波長530±12.5nm，并置零
• 實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出500微升稀釋液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入2.5微升染色液（Reagent A），混勻后，用錫紙包裹，標記為染色工作液（5次測定量），放在暗室里。然后進行下列操作。

• 構(gòu)建標準曲線

• 準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管
• 分別加入100微升稀釋液（Reagent B）到每個離心管
• 移取100微升標準液（Reagent C）到1號管，混勻
• 小心移取100微升1號管稀釋的標準液（Reagent C）到2號管，混勻
• 小心移取100微升2號管稀釋的標準液（Reagent C）到3號管，混勻
• 小心移取100微升3號管稀釋的標準液（Reagent C）到4號管，混勻
• 將1至5號管放進冰槽里備用；標準管含量見下表

• 移取100微升含有染色液（Reagent A）和稀釋液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿
• 加入100微升上述配制的標準液
• 室溫下，孵育5分鐘，避免光照
• 即刻放進熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
• 重復(fù)實驗步驟8至11四次
• 繪制標準曲線：縱座標（Y軸）為相對熒光單位（RLU）；橫坐標（X軸）為DNA含量（微克/毫升）

• 樣品檢測

• 移取100微升含有染色液（Reagent A）和稀釋液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿
• 加入100微升待測樣品
• 室溫下，孵育5分鐘，避免光照
• 即刻放進熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
• 根據(jù)標準曲線獲得樣品對應(yīng)RNA含量（微克/毫升）

注意事項

• 本產(chǎn)品為25次操作，包括標準曲線測定
• 整個操作須帶手套，建議使用濾芯槍頭，并格外小心，防止降解RNA
• 建議所有的操作用品屬于RNA專用
• 使用新鮮配制的染色工作液，務(wù)必不要超過2小時，且注意避光
• 孵育時，避免光照
• 系統(tǒng)檢測，標準曲線測定1次即可；如果儀器更換，則需要重新測定1次
• 如果熒光讀數(shù)過高，可以相應(yīng)稀釋樣品量
• 鹽類、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白、瓊脂糖不會干擾檢測
• 如果樣品中含有DNA，建議使用5單位DNA酶，37℃孵育90分鐘預(yù)處理
• 標準曲線參考如下：

• 本公司提供系列RNA檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定高度敏感

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