真菌/酵母細胞總RNA分離試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

真菌/酵母細胞總RNA分離試劑是一種旨在通過化學和生物酶裂解、破壁以及有機溶劑等處理來達到純化總RNA的常用技術方法。其適用于各種實驗用真菌/酵母菌株總RNA樣品的制備。產品即到即用，性能穩定，操作便捷，純化程度高。

技術背景

真菌/酵母菌是一種低等單細胞真核生物，具有細胞生長快，易于培養，遺傳操作簡單明了等原核生物的特點。作為模式生物，它具有比較完備的基因表達調控機制和表達產物的加工修飾能力，在分子遺傳學方面認識最早，最先作為外源基因表達的細胞宿主。它是一種哺乳動物基因調節的理想研究工具。真菌/酵母總RNA純化采用“砸櫥窗搶劫”（smash and grab）的技術手段，即通過生物酶消解、化學去污劑裂解，然后是有機化沉淀等綜合處理而獲得。

產品內容

清理液（Reagent A）  40毫升

平衡液（Reagent B）  40毫升

溶解液（Reagent C）  20毫升

酶解液（Reagent D） 200微升

裂解液（Reagent E）    20毫升

酸珠液（Reagent F）   2毫升

萃取液（Reagent G）         20毫升

沉淀液（Reagent H）         10毫升

凈化液（Reagent I）         20毫升

保存液（Reagent J）      1毫升

產品說明書      1份

保存方式

保存酶解液（Reagent D）和萃取液（Reagent G）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

15毫升離心管：用于樣品處理的容器

2毫升離心管：用于樣品操作的容器

微型臺式離心機：用于沉淀真菌/酵母和核酸

渦旋震蕩儀：用于混勻反應物

恒溫水槽：用于孵育反應物

實驗步驟

• 準備好2毫升新鮮的酵母菌液（OD600＝1至2；1 X 10⁷細胞/毫升）
• 移入到2毫升離心管
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入2毫升清理液（Reagent A），混勻
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入2毫升平衡液（Reagent B），混勻
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入800微升溶解液（Reagent C），混勻
• 加入10微升酶解液（Reagent D）
• 放進30℃恒溫水槽孵育30分鐘
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升裂解液（Reagent E）
• 加入100微升酸珠液（Reagent F）
• 渦旋震蕩儀上強力震蕩2分鐘
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到新的2毫升離心管
• 加入1毫升萃取液（Reagent G）
• 強力渦旋震蕩30秒
• 置于冰槽里孵育15分鐘
• 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取1毫升上層液相溶液到新的預冷的1.5毫升離心管，留下（丟棄）25微升相位交界面的溶液
• 加入500微升沉淀液（Reagent H），混勻
• 置于－20℃冰箱里，孵育15分鐘
• 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升凈化液（Reagent I）
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 空氣中晾干
• 加入50微升保存液（Reagent J）
• 放進－70℃冰箱里儲存備用

注意事項

• 本產品為20次（2毫升菌液）操作
• 如果制備不同規格的真菌/酵母總RNA，可按比例調整試劑用量
• 操作時須戴手套
• 整個操作須在4℃狀態下進行
• 建議使用濾芯槍頭，并格外小心，防止降解RNA
• 建議所有的操作用品屬于RNA專用
• 確保起始酵母菌量
• 酸珠液（Reagent F）為固體狀，移取方法為：使用1毫升槍頭，將尖端部分剪去；或使用0.5毫升PCR管的蓋子內圈盛滿；或秤重0.1克
• 通常1 X 10⁷細胞中可以提取50微克總RNA量
• 總RNA濃度測定（納克/微升）=OD260 X 1000 X 4 (1:100稀釋)；如果稀釋倍數1:200，則系數為8； 稀釋倍數1:400，則系數為16
• 純化的RNA保存在－70℃冰箱里，避免反復凍融
• 本公司提供系列RNA產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無核酶成分
• 本產品經鑒定純化產量和程度皆高

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