細胞去甲基化處理試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

細胞去甲基化處理試劑是一種旨在使用DNA甲基轉移酶抑制劑5-氮雜-2-脫氧胞苷誘導細胞基因脫甲基，重新改變染色質結構模型，產生基因組內甲基化缺失狀態的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于動物細胞和人體細胞。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，作用顯著。

技術背景

在基因的啟動子區域（promotor region）通常存在一些富含重復雙核苷酸“CG”的區域，稱為“CpG島”（CpG island）。在人類基因組內，存在有近3萬個CpG島。這些CpG島不僅是基因的一種標志，而且還參與基因表達的調控和影響染色質的結構，更是DNA甲基化的唯一位置。5-氮雜-2-脫氧胞苷（5-Aza-2-deoxycytidine；5-aza-cdR或5-aza-dC）是一種脫甲基的氨基乙醇，又稱DECITABINE。作用于強力抑制DNA甲基轉移酶（DNA methyltransferase）。其分子式為C8H12N4O4，分子量為228.2。通過去甲基化處理，染色質結構模型重新改變，使轉錄因子能夠結合在啟動子上，形成轉錄復合物，啟動基因表達。

產品內容

處理液（Reagent A）          2毫升

清理液（Reagent B）      100毫升

產品說明書           1份

保存方式

保存處理液（Reagent A）在－20℃冰箱里，避免反復凍融；保存清理液（Reagent B）在4℃冰箱里； 有效保證6月

用戶自備

25cm²細胞培養瓶：用于培養細胞的容器

 DMEM完全細胞培養基（12052）：用于細胞培養的營養基

血細胞計數器：用于細胞計量

實驗步驟

• 準備1瓶25cm²細胞培養瓶
• 接種用戶需化學去甲基化的細胞（1 X 10⁵細胞總量）
• 放進37℃細胞培養箱孵育24小時，或直到細胞生長密度達10％
• 小心抽去細胞培養液
• 小心加入3毫升用戶自備的完全細胞培養液
• 小心加入30微升 處理液（Reagent A） 
• 輕輕搖勻后，放進37℃細胞培養箱孵育24小時
• 小心抽去含有 處理液（Reagent A）的細胞培養液
• 重復實驗步驟5至8二次
• 小心加入3毫升清理液（Reagent B），清洗生長中的細胞表面
• 小心抽去 清理液（Reagent B）
• 繼續后續操作

注意事項

• 本產品為20次操作
• 操作時，須戴手套
• 操作時，須嚴格無菌操作
• 用戶可以根據需求，使用不同的培養皿或培養瓶，相應調整試劑用量
• 處理液（Reagent A）的使用比例為1：100，即1毫升培養液加入10微升處理液（Reagent A）
• 本公司提供系列甲基化分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定去甲基化作用顯著

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