人體腫瘤β-catenin 突變巢式分析試劑盒產品說明書

主要用途

人體腫瘤β-catenin 突變巢式分析試劑是一種旨在方便、快速地進行各種人體腫瘤細胞或組織中與腫瘤發生發展密切相關的信號傳導因子―β-連環蛋白（β-catenin）的外顯子3（exon 3）熱點區域（hot spot）的基因突變檢測的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的一步法熱啟動高保真PCR和直接測序檢測體系。靈敏度、特異性、穩定性優勢明顯。擴增產量高，測序效果好，突變發現易。產品即到即用，無核酶污染，性能穩定，操作方便迅速，質量保證。

技術背景

β-連環蛋白（β-Cadherin-associated protein；CTNNB1；β-catenin；β-cat）是近年來發現的一種信號傳導分子。它是一種多功能的蛋白質，在細胞間粘附和Wnt信號傳導中起作用。其在腫瘤發病機制中的作用是目前研究的熱點之一。它具有23.2 Kb DNA堿基，16外顯子，3362 mRNA堿基，781氨基酸，92KD 蛋白質。其中外顯子3的熱點區域是GSK-3b（glycogen synthase kinase -3b）磷酸化的重要位置。該區域的基因突變是導致腫瘤發生的原因之一。檢測β-catenin 外顯子3的熱點區域基因突變可篩查易患結腸癌、肝癌、卵巢癌、黑色素瘤等的高危人群。 

產品內容

擴增液（Reagent A）   2毫升

補充液（Reagent B） 1毫升

酶解液（Reagent C）    200微升

引物F液（Reagent D）    100微升

引物R液（Reagent E）    100微升

產品說明書    1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，有效保證6個月

用戶自備

DNA純化試劑盒：用于各種樣品DNA的純化

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

PCR儀：用于樣品擴增

PCR管或平板：用于PCR反應的容器

測序試劑盒：用于測序前的產物處理

實驗步驟

• 將擴增液（Reagent A）和補充液（Reagent B）從－20℃冰箱里取出
• 置入冰槽里直至融化
• 針對一個樣本，每次移出17微升擴增液（Reagent A）到PCR管或平板
• 加入1至3微升用戶待測的DNA樣品
• 再加入5至7微升補充液（Reagent B）（總量為25微升）
• 即刻進行PCR反應：

• 反應完畢后，移出10微升反應液到新的1.5毫升離心管
• 加入2微升酶解液（Reagent C）
• 放進37℃恒溫水槽孵育1小時
• 放進95℃水槽孵育30分鐘
• 在室溫下靜置15分鐘
• 分別移出2微升反應液到2個不同的新的1.5毫升離心管
• 加入1微升引物F液（Reagent D）到其中一個1.5毫升離心管，作好標記
• 加入1微升引物R液（Reagent E）到另一個1.5毫升離心管，作好標記
• 進行后續的直接測序反應
• 突變分析序列：

注意事項

• 本產品為100次操作

• 操作時，須戴手套
• 建議整個操作在4℃下進行

• 使用時，避免污染母液
• 根據用戶PCR儀的性能，決定是否加入礦物油（Mineral Oil）
• 試劑避免反復凍融
• 附件提供β-catenin的DNA和氨基酸的完整序列
• 本公司提供系列人體腫瘤標志基因檢測分析產品 

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無核酶污染
• 本產品經鑒定反應產量高

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