組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑是一種旨在通過偶氮生色底物，與還原后的一價銅反應產生紫色螯合復合物，在分光光度儀下通過吸光峰值的變化，即采用比色法來測定樣品中總銅濃度的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物和人體組織裂解懸液樣品中總銅的濃度檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，檢測敏感。

技術背景

銅為人體營養中的必需的微量元素。作為輔因子，含銅酶蛋白在鐵和兒茶酚胺（catecholamine）代謝、游離自由基清除、血紅蛋白、彈力纖維和膠原蛋白合成等活動中起著重要作用，從而調節體內氧化還原狀態銅在肝臟和血漿中以銅藍蛋白（caeruloplasmin）形式存在，具有鐵氧化酶抗氧化活性。銅含量過低，會導致智力遲鈍、色素脫失、貧血、張力減退、骨壞血病變化。一旦缺失，將導致心臟病變、骨質疏松、骨關節炎、Menkes綜合征、威爾森氏癥等。由此，銅含量檢測成為威爾森氏癥、小細胞低色素性（microcytic hypochromic anemia）貧血、骨病等的診斷指標。銅的檢測包括化學法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技術，但容易受到其它金屬元素的干擾，或者受限于儀器的特殊的要求。4-(3,5-溴基-2-吡啶偶氮基)-5-(N-乙基-N-磺丙基)苯胺（4-(3,5-Bromo-2-pyridylazo) -5-(N-ethyl-N-sulfopropyl)aniline；Di-Br-PAESA）比色法是一種穩定、簡便、準確的銅檢測技術。在弱酸性條件下，銅從復合物中解離出來；抗壞血酸（還原型）將解離出來的二價銅離子還原成一價銅離子，一價銅離子與顯色劑 DiBr-PAESA生成紫色絡合物，在分光光度儀下通過吸光峰值的變化（波長580nm），來定量測定組織銅的總濃度。其反應系統為：

   Copper  +  Di-Br-PAESA   →    blue chelated complex

產品內容

清理液（Reagent A）      60毫升

裂解液（Reagent B）      10毫升

去干擾液（Reagent C）  1毫升

緩沖液（Reagent D）      20毫升

還原液（Reagent E）       4瓶

顯色液（Reagent F）       1毫升

標準液（Reagent G）    200微升

產品說明書     1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，有效保證3月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

DOUNCE勻漿器：用于組織勻化

微型臺式離心機：用于樣品制備

比色皿：用于反應的容器

分光光度儀：用于比色分析

實驗步驟

• 樣品準備

• 手術取出動物組織，并秤重以確定500毫克組織重量 
• （選擇步驟）放進預冷的15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入3毫升清理液（Reagent A）清洗1次
• 移入到一個液氮凍存管
• 即刻放進液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：切莫使組織凍融）
• 放進一個15毫升錐形離心管
• 加入預冷的500微升裂解液（Reagent B） 
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 即刻放進預冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約40下）
• 轉移到預冷的1.5毫升離心管
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取500微升上清液到新的預冷的1.5毫升離心管
• 移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用 Bradford蛋白質濃度定量試劑盒－30030.1）
• 加入50微升抗干擾液（Reagent C）
• 渦旋震蕩10秒
• 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管
• 即刻放進－70℃保存或置于冰槽里繼續后續操作

二、測定準備

• 準備好待測樣品，置于冰槽里備用
• 設定好分光光度儀：波長580nm（570至590nm波長），并置零 
• 實驗開始前，移取5毫升緩沖液（Reagent D）到1瓶還原液（Reagent E）中，混勻后，標記為反應工作液，置于冰槽里備用，避免光照。

三、比色測定

• 移取1毫升上述配制的反應工作液到新的1毫升比色皿
• 加入100微升標準液（Reagent G）或待測樣品
• 加入50微升顯色液（Reagent F）
• 上下傾倒數次，混勻
• 37℃室溫下孵育5分鐘，避免光照
• 即刻放進分光光度儀檢測：獲得吸光讀數（OD） 
• 計算樣品銅濃度

（待測樣品讀數÷標準樣品讀數）X 500（標準濃度；微克/分升）＝微克/分升

注意事項

• 本產品為20次操作，包括標準液
• 本產品線性范圍為10微克/分升至1毫克/分升
• 操作時，須戴手套
• 避免使用EDTA等處理樣本
• 系統操作過程中，標準液測定只需1次
• 孵育反應完成后即刻進行比色測定，不宜超過2分鐘
• 比色測定后，比色皿須清洗徹底
• 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度
• 用戶可以換算獲得：微克/毫克組織或蛋白；微摩爾/毫克組織或蛋白
• 微克/分升換算成微摩爾/升：微克/分升 X 0.1573
• 建議用戶建立正常參考值
• 本公司提供系列銅生化檢測試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定檢測敏感

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