肥胖和饑餓是兩個密切相關的生理狀態，涉及復雜的神經和激素調控機制。在研究這些代謝機制時，對饑餓信號敏感的NPY/AgRP神經元扮演了重要角色。今天，小賽要為大家介紹靶向下丘腦弓狀核的Agrp-IRES-CreERT2-P2A-tdTomato小鼠（產品編號：C001558）。

NPY/AgRP神經元
大腦中的NPY/AgRP神經元僅存在于下丘腦弓狀核（ARC），在饑餓狀態下高度活躍。這些神經元不僅通過增加神經肽Y（NPY）信號傳導，還通過釋放AgRP來抑制黑皮質素信號傳導，從而制造肽類物質，有效促進食欲^[1]。AGRP基因編碼的刺鼠肽基因相關蛋白（Agouti-related protein, AgRP）是一種由NPY/AgRP神經元在大腦中產生的神經肽，主要在下丘腦弓狀核、腎和腎上腺中表達。AgRP僅在下丘腦弓狀核腹側部分的含有神經肽Y（NPY）的細胞體中合成，并與NPY共表達，起到增加食欲、減少新陳代謝和減少能量消耗的作用，是最有效和持久的食欲刺激劑之一。
 

圖1 NPY/AgRP神經元位于下丘腦弓狀核內^[2]

賽業生物利用基因編輯技術構建了Agrp-IRES-CreERT2-P2A-tdTomato小鼠（產品編號：C001558），在小鼠內源性Agrp基因調控元件驅動下，該小鼠表達他莫昔芬誘導型CreERT2重組酶。此外，該品系的CreERT2重組酶表達元件后攜帶了一個紅色熒光蛋白（tdTomato）表達元件，可用于Agrp陽性細胞的譜系追蹤。在未經他莫昔芬處理時，CreERT2重組酶只存在于細胞質中。經他莫昔芬處理后，CreERT2重組酶才能進入細胞核并發揮其重組作用。當Agrp-IRES-CreERT2-P2A-tdTomato小鼠與含有loxP位點的小鼠雜交后，經他莫昔芬誘導可以在子代小鼠的AgRP陽性神經元中引發由Cre重組酶介導的loxP位點間的序列重組。

在下丘腦中成功介導Zsgreen熒光蛋白表達

圖2 下丘腦中Cre重組酶的表達情況

將Agrp-IRES-CreERT2-P2A-tdTomato小鼠與條件性表達Zsgreen熒光蛋白的LSL_Zsgreen小鼠交配，他莫昔芬（Tamoxifen）誘導完成后，采集子代小鼠的下丘腦組織并通過冰凍切片檢測組織中Zsgreen蛋白的自發熒光情況。結果顯示，在他莫昔芬處理后，Agrp-IRES-CreERT2-P2A-tdTomato; LSL_Zsgreen雙陽性小鼠下丘腦中存在自發綠色熒光信號且信號特異性存在于下丘腦弓狀核（ARC）區域。

tdTomato熒光蛋白與Zsgreen熒光蛋白表達共定位

圖3 下丘腦中Zsgreen綠色熒光蛋白表達與tdTomato紅色熒光蛋白表達的共定位情況

通過tdTomato蛋白表達的免疫熒光染色（IF）檢測，確定該模型中tdTomato蛋白標記的細胞類型。結果顯示，Agrp-IRES-CreERT2-P2A-tdTomato; LSL_Zsgreen雙陽性小鼠在他莫昔芬處理后的下丘腦中可同時檢測到tdTomato紅色熒光蛋白和Zsgreen綠色熒光蛋白信號，且Cre重組酶誘導的Zsgreen綠色熒光信號與小鼠內源性Agrp調控的tdTomato熒光信號共定位，表明在該模型中Cre重組酶的表達模式與小鼠內源性Agrp相同。

總  結
在Agrp-IRES-CreERT2-P2A-tdTomato小鼠（產品編號：C001558）模型中，Cre重組酶的表達主要集中于下丘腦弓狀核（ARC）區域。

本文摘自：https://www.cyagen.cn/articles/AE000705