HRM技術服務之甲基化檢測（MS-HRM技術） 

    DNA甲基化是發生在DNA堿基序列上的一種共價修飾。在哺乳動物中，DNA甲基化主要發生在5-CpG-3雙核苷酸序列的胞嘧啶上。在人類基因組中，大約有60～70的CpG胞嘧啶是甲基化的，其程度因不同的物種和細胞類型而異。DNA甲基化狀態在基因組中呈現出一定的分布模式，90％的甲基胞嘧啶位于重復序列上。DNA甲基化可以遺傳，并改變了DNA的結構特性與基因活動方式。

DNA甲基化意義：

    靶序列上甲基基團的存在可以影響轉錄因子的結合，引起轉錄抑制，從而使該基因表達受到抑制。啟動子區CPG島的甲基化常常可以抑制該基因的轉錄，尤其是對于抑癌基因，凋亡相關基因，DNA修復基因等，啟動子區域發生甲基化會影響功能的發揮。不同的腫瘤組織基因甲基化狀態不一樣，可以作為早期檢測，監測腫瘤形成的重要標志物。對于某些特異基因的甲基化，更加重要，如DNA修復基因，可以引起對化療藥物的敏感，從而作為藥物治療療效的評價指標，指導臨床用藥。

檢測方法：

    甲基化特異性PCR、Northern印跡法、Western印跡法、免疫細胞化學等，這些檢測方法需要花費大量時間，成本高，在臨床推廣應用時均存在一定的困難。

    高分辨率熔解（High  Resolution Melt,HRM）是一種最新的在表觀遺傳學中檢測 CpG 位點的一種新技術，主要是根據DNA序列的長度、GC含量、堿基互補性差異和特定飽和染料可以插入DNA雙鏈中的特性,應用高分辨率的熔解曲線對樣品進行分析，其分辨精度可以達到對單個堿基差異的區分。

     作為新一代的遺傳掃描工具，HRM具有“簡、效、快、廉”等其它技術難以比擬的優勢：
 簡：無需序列特異性探針，不受堿基位點局限，同時檢出已知或未知突變、SNP和甲基化位點；閉管操作，避免交叉污染。
 效：最低檢測0.1-0.01的突變或異常甲基化，檢測SNP靈敏度和特異性均為100。
 快：1次同時檢測不多于384個樣本，在60-90分鐘內完成檢測。
 廉：簡化操作步驟、降低人工和試劑成本，費用遠少于測序、Taqman探針等方法。

    HRM技術特別適用于樣本量多、檢測位點較少的SNP、突變或甲基化分析，是不同于基因芯片檢測方法（檢測位點多，樣本少）的高通量方法。同時，也是基因芯片篩選后的多個基因在更多標本中驗證的最佳方法。

DNA甲基化-HRM檢測原理：

    甲基化敏感性高分辨率熔解曲線分析（MS-High Resolution Melting Curve Analyse）是一種不需要 PCR 產物后續操作的，簡單且靈敏的檢測基因甲基化水平的方法。該方法主要通過比較曲線的熔解溫度和峰形得以實現并且可以在一些列的 CpG 位點中檢測出單一的一個甲基化的發生，同時，也可以對一系列的 CpG 位點的甲基化水平進行分析。單個 CpG 位點的甲基化和平均的甲基化水平會對熔解曲線的形狀造成影響。采用重亞硫酸鹽處理 DNA 模板可以使 5-甲基胞嘧啶轉化為尿嘧啶。在PCR反應前，在非CpG島位置設計一對針對經亞硫酸氫鈉處理后DNA 鏈的引物，這對引物中間包含有意義的甲基化CpG島，一旦這些CpG島發生甲基化，使胞嘧啶（C）不發生變化，而與未甲基化的胞嘧啶（C）轉變成胸腺嘧啶（T），樣品中的 GC 含量發生了變化，最終被轉化成了熔解曲線 Tm 值之間的差異。 CpG 位點在小的擴增片段內的相對位置也會對熔解峰的形狀產生影響，因此， 根據Tm值和熔解峰的形狀可以檢測出樣本的甲基化位點和甲基化程度。

    HRM方法操作簡單、靈敏高、重復性高、成本低、不受檢測位點的局限高度等等優勢，將對于遺傳學、腫瘤學等方面的研究和臨床應用提供更大的幫助。

我們的服務：

 免費的項目咨詢
 客戶提供樣本DNA的分離、純化（可有為真公司代為提取）
 根據客戶提供相關信息進行引物設計、方案設計
 亞硫酸氫鈉處理DNA并運用HRM技術獲得特異溶解曲線
 結果分析，出具實驗報告，為臨床用藥提供依據

我們的優勢：

   蘇州為真生物在MS-HRM分析和研究方面積累了豐富的經驗，擁有開展MS-HRM研究的先進儀器設備，具有自己獨到的研究策略和方法，能為你高效快速的進行MS-HRM分析，找出有意義的CpG甲基化。

服務熱線：13913580076

蘇州為真生物醫藥有限公司
Suzhou MicroDiag Biomedicine Co., Ltd.


蘇州為真生物醫藥有限公司（Suzhou MicroDiag Biomed Co., Ltd）/蘇州腫瘤分子診斷工程技術研究中心是一家擁有一支學科結構合理、掌握國際領先技術、富有創新精神的專業技術人才團隊的醫藥類高科技研發型企業，立足于開發自主知識產權的癌癥個體化醫療診斷試劑盒，致力于成為“個性化醫療時代” 的檢測專家！公司2008年9月注冊成立，資金1010萬，由國內著名風投機構中新創業投資有限公司投資，正進行千萬美元級別的I期融資。

公司坐落于國家級高新技術開發區——蘇州工業園（China-Singapore Suzhou Industrial Park）生物納米科技園（bioBay）。目前公司/中心已建立標準化實驗室、III類GMP標準分子診斷試劑盒生產車間和II類醫療器械生產廠房，總面積超過3000m2；現有高級研究員5名，歸國人員2名，博士8名，碩士十余名，員工均本科以上學歷；配備LightCyclerTM 480 PCR儀、Nano1000定量儀、Bio-Rad蛋白電泳儀、DAKO自動染色成像儀、BD FACSCalibur流式細胞儀等現代化分子實驗儀器。2010年4月中心/公司獲江蘇省藥監局頒發的III類分子診斷試劑盒和II類醫療器械生產許可證。

公司已獲批準“蘇州腫瘤分子診斷工程技術研究中心”，已申報建設“江蘇省腫瘤分子診斷工程技術研究中心”，公司是“蘇州市內資研發機構”， “江蘇省民營高科技企業”。近期，中心/公司作為核心成員參加由中國醫學科學院和蘇州工業園區聯合組建的“蘇州創新生物醫藥研究中心”，承擔其中“腫瘤分子診斷平臺”建設和運行。

蘇州為真以領先的癌癥檢測國際專利技術MiDTM為依托，正引領癌癥篩查和診斷全面進入“分子”時代。MiDTM突破了從腫瘤細胞死亡后DNA片段中檢測微量突變的關鍵技術，第一次實現了血清或血漿等非細胞體系的基因突變的高靈敏度集成式檢測，已形成三大系列檢測產品：“個性化用藥指導檢測試劑盒”、“早期癌癥篩查和診斷試劑盒”、“癌癥篩查套餐和預后、復發監控的產品”，形成國內最全面最專業的個性化醫療檢測方案，實現個性化用藥指導、健康篩查、超早期預警、早期診斷、預后指導和復發監控等。已獲5項國家發明專利，申請15項新發明專利，包括7項國際發明專利。2009年獲省部級課題經費達到128萬余元，2010年預計研究經費超過400萬左右。


為真人始終堅持“為真求實，開拓創新”的價值理念，以實現“更好的診斷(Better Diagnosis)，更好的健康(Better Health)”是自己不懈的使命。