超過百個成功敲入KI案例，蘇州阿爾法生物攜手海星生物一站式解決細胞基因功能研究純合/雜合敲入細胞系。

  Cas9-Cell line Knock-In service（Cas9-CKI）基因定點敲入細胞系是Cas9X技術團隊針對實驗室常用的各種細胞系，研究并確立針對不同的細胞的外源基因或者片段高效敲入（Knock-in, KI）的技術操作規(guī)程，主要目的就是：解決KI效率低下和KI片段長度限制的問題。

   目前使用Cas9的進行基因KI研究方法，主要應用在目的基因后面加上標簽，對目的蛋白進行定位；再有就是通過對小鼠細胞的目的基因進行修飾替換成為人的基因，用于動物的CDX模型等。KI實現(xiàn)的方案包括：使用合成的Oligo或者ssDNA（single-stranded DNA，ssDNA）作為“Donor”來實現(xiàn)長片段的敲入；也可以通過AAV病毒的方式（其病毒以ssDNA的方式存在于細胞核中）導入ssDNA作為“Donor”載體，也可以通過dsDNA片段或者環(huán)狀質(zhì)粒作為“Donor”來實現(xiàn)KI的目的。

     但是不同的細胞模型KI的效率依然不能令人滿意，且不同的細胞系之間的效率差異很大，很多細胞無法實現(xiàn)定點的KI。 Cas9X針對不同的片段的長度和不同的細胞特性使用不同的KI策略：小的片段使用Oligo進行KI，再長一點的使用ssDNA進行KI，如果長度超過1Kb的將使用重組的辦法進行KI。針對細胞系的KI效率非常低的，需要先構建Cas9穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株再進行gRNA和Donor的轉(zhuǎn)染來提高KI效率。Cas9X努力優(yōu)化實驗條件滿足不同細胞系和不同片段長度的KI服務需求。

Cas9基因編輯- 基因定點敲入 技術服務 為你的細胞探索優(yōu)化的KI實驗方案。



 我們還能為您提供：
基因敲除細胞系服務
基因點突變細胞系服務
基因定點敲入細胞系服務
微生物基因編輯服務
基因敲除Cell Pool服務

 案例分析

  基因敲入項目名稱

  構建eGFP基因敲入的人膠質(zhì)瘤細胞細胞
實驗設計

種屬：Human； 基因名稱：PRNP
gRNA位點：ATCTTCCTGATAGTGGGATGAGG 
Donor載體：5'arm-eGFP-3'arm

[基因敲入技術原理圖]

細胞信息

種屬：Human； 細胞名稱：人膠質(zhì)瘤細胞U251
培養(yǎng)基：DMEM，10%FBS 
  
細胞檢測

無菌檢測：合格； 支原體檢測：合格
細胞克隆形成率檢測：細胞增殖能力較好，克隆形成率較好。 
細胞基因型檢測：針對gRNA打靶位置及其附近基因組序列進行測序。測序結果與理論序列一致。 
 
細胞轉(zhuǎn)導                                                           

電轉(zhuǎn)參數(shù)：1005V，35ms，2次； 電轉(zhuǎn)體系：10 uL
  
PCR 篩選

篩選克隆數(shù)量：160； 陽性數(shù)量：10

[電泳示意圖]
 

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