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由于RNA樣品易受環境因素特別是RNA酶的影響而降解，提取高質量的RNA樣品在生命科研中具有相當的挑戰性。RNA提取對樣品的新鮮性要求非常高，獲取樣品后最好立即提取RNA，若無條件立即實驗，應于-80℃或液氮中保存樣品，提取時取出樣品后立即在低溫下研磨裂解細胞，以防RNA降解。
目前普遍使用的RNA提取法有兩種：基于異硫氰酸胍/苯酚混合試劑的液相提取法（即Biozol類試劑）和基于硅膠膜特異性吸附的離心柱提取法。
1、異硫氰酸胍/苯酚混合試劑的液相提取法
試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。細胞裂解之后要看不見顆粒狀物質（結締組織和骨除外）。在清洗和裂解細胞時不需要在低溫下操作，及時在操作過程中釋放的內源RNase，也會被TRIZOL中的強變性劑所抑制。當加入氯仿時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層（無色）主要為RNA，有機層（黃色）主要為DNA和蛋白質。Biomiga提供的Biozol溶液即基本基于這一原理。
2、硅膠膜特異性吸附的離心柱提取法
采用一系列裂解液裂解組織、細胞，抑制RNA酶，釋放RNA，調節結合條件之后，硅膠膜特異性吸附RNA，多次漂洗去除DNA、蛋白質及其他雜質，最后經低鹽溶液洗脫得到RNA。
溶液的主要成分為胍鹽，對于某些次生物質含量豐富的多糖多酚類植物組織，比如棉花和葡萄葉子，Biomiga在常規胍鹽的基礎上進行了改進，添加了一些對多糖多酚類物質結合力很強的成分，像Plantaid可以高效結合多糖多酚，然后在離心的過程中去除。
Biomiga公司提供產品采用離心柱法，操作簡便、快速、不含有毒有害物質。其提取步驟分為樣品處理、細胞裂解、RNA純化三個方面。
實驗步驟：
樣品處理：
樣品材料進行破碎（及勻漿）可以提高裂解效率，組織破碎后可以充分與裂解液接觸，利于裂解。不同來源的組織材料，根據組織成份的差異，樣品處理的方式也有所差異。一般來說，樣品的破碎方式，主要有液氮研磨、勻漿和蛋白酶K消化。
1）植物和真菌:液氮研磨，也可以加入裂解液后快速勻漿；
2）動物組織：勻漿，液氮研磨，加熱，部分組織如肝臟，可加入蛋白酶K進行裂解；
3）革蘭氏陰性菌與細胞：直接裂解；
4）革蘭氏陽性菌酵母：玻璃珠和酶破壁
細胞裂解：
樣品經液氮研磨或勻漿之后，加入裂解液裂解細胞，抑制RNA酶，釋放RNA，經吸附、漂洗、洗脫后得到高質量RNA。
RNA純化：
DNA去除可以用DNase I消化，也可以使用Biomiga獨特的DNA Clean Column，可以簡單告訴地去除絕大部分基因組DNA。
服務內容及價格：
我們使用進口優質試劑盒，潔凈空間操作，提取的總RNA可以滿足southern blot以及qPCR等高標準實驗要求，如果您的樣品數量較多，請聯系技術支持人員，享受折扣優惠！
服務說明：
具體問題歡迎與我們技術人員聯系400-115-2855。
