蛋白質印跡法（免疫印跡實驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。是將電泳分離后的細胞或組織總蛋白質從凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質檢測技術，現已廣泛應用于基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。

基本原理:

通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。

雖Western Blot方法非常成熟，且大多實驗室均具備Western Blot的實驗能力。但是要得到一份背景清晰、條帶明亮、真實客觀的實驗結果，需要投入大量的時間和精力，倍沃醫學技術人員，在樣品處理、轉印和抗體稀釋比例等操作上具有特殊的技巧，能夠為客戶的樣品量身定制實驗方案。

Western Blot實驗流程

1）蛋白質抽提 

A、實驗對象為組織樣品，取適量（250-500 mg）新鮮組織樣品，加1 mL含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑），勻漿后抽提總蛋白。 

B、實驗對象為細胞樣品，每份樣品取1×10＾6～1×10＾7細胞，PBS清洗細胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑）抽提總蛋白。 

2）蛋白質定量

按蛋白質定量試劑盒操作說明操作，測定樣品濃度。 

3）變性聚丙烯酰胺不連續凝膠電泳(SDS-PAGE) 

將準備好的樣品液和生物素標記的蛋白質分子量標準分別上樣，標準加進第一個孔中，電泳分離蛋白。 

4）蛋白質轉移到硝酸纖維膜或PVDF膜 

5）膜的封閉和抗體孵育 

A、膜在5％BSA溶液中室溫孵育1小時以封閉膜上的非特異結合。 

B、封閉過的膜加入一級抗體室溫孵育1.5小時，抗原抗體結合。 

C、加入HRP標記的二級抗體以結合一級抗體及HRP標記的抗生物素抗體以結合分子量標準，室溫孵育膜1小時。加入HRP標記的GAPDH抗體可同時檢測GAPDH含量。

6）結果檢測

化學發光法檢測，膜與化學發光底物孵育，經X膠片曝光顯影。 

7）提供實驗報告

包括詳細的實驗方法及Western Blot實驗結果。

服務內容及價格：

客戶需自己提供一抗，或由倍沃醫學提供。我們免費提供標記二抗和內參抗體α-Tublin，β-actin，GAPDH。

服務說明：

1）送樣要求：

1.1 樣品以冰盒形式運輸；

1.2 樣本量：組織＞300 mg;液體＞1 mL；

1.3 送樣前，確保樣品均一性與標簽清晰；

2）歡迎詢價:

如果您的樣品數量較多，請聯系技術人員400-115-2855，享受折扣優惠！