Label-free技術即非標記定量蛋白質(zhì)組分析技術,是通過液質(zhì)聯(lián)用技術對蛋白質(zhì)酶解肽段進行質(zhì)譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標簽做標記,只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣本中相應肽段的信號強度,從而肽段對應的蛋白質(zhì)進行相對定量。
技術原理
每條肽段的豐度(量)與其在MS1中的峰面積或信號強度成正比;而不同樣本的同一條肽段在色譜上的保留時間是一致的,因此,可通過對比MS圖譜,再整合到相應蛋白,實現(xiàn)對蛋白質(zhì)在不同樣本中的相對表達水平的定量分析。
實驗流程
提取樣本中的總蛋白,取出一部分做蛋白濃度測定及SDS-PAGE檢測,另取部分進行胰蛋白酶酶解,對酶解肽段除鹽后,對樣本進行質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)分析
技術特點
1、無需標記,操作簡單;
2、不受比較樣品數(shù)限制;
3、對實驗操作穩(wěn)定性、重復性要求高,要求至少做三次技術重復或生物重復;
4、準確性較標記定量差。
應用領域
1、適合大樣本量的定量比較
2、對無法用標記定量實現(xiàn)的實驗設計,易用label-free技術
3、要求物種具有蛋白質(zhì)參考數(shù)據(jù)庫、EST序列(轉(zhuǎn)錄組)或基因組注釋信息
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