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Vari Fluor 熒光染色試劑盒

MCE 國際站：Vari Fluor 3-colour Multiple Fluorescent Staining Kit (For mouse samples)

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-KD1001

存儲條件：4°C ，1 年注意避光。

產品活性：MCE 提供多種多重熒光檢測試劑盒，最高可對六種指標進行同時檢測，最大程度滿足客戶實驗需求。

描述及優勢：多重熒光免疫組化技術 (Multiplex immunohistochemical) 也稱作酪氨酸信號放大 (TSA, Tyramide dignal amplification) 技術。是一類利用辣根過氧化酶 (HRP) 對靶蛋白或核酸進行高密度原位標記的酶學檢測方法。該方法基于酪胺信號放大的多重順次免疫染色技術，可以在細胞或組織樣本原位上檢測多個目標靶點，通過這些靶點的組合和位置關系的研究，進而闡明其相互作用機理。 MCE 提供多種多重熒光檢測試劑盒，最高可對六種指標進行同時檢測，最大程度滿足客戶實驗需求。

操作流程：染料配制染料使用方法：TSA熒光染料工作液= VF 熒光染料 + TSAbuffer；推薦熒光染料和 TSA buffer 的稀釋比為 1：200；稀釋比例可以根據具體情況靈活調整優化，最佳范圍為 1:50-- 1:400；一般建議若一抗孵育時間常溫 1 h-3 h 內，建議稀釋比例 1:50 - 1:200, 若一抗孵育時間 4℃ 過夜（12 h 或以上），建議稀釋比例 1:200- 1:400 或更高。實驗步驟 樣本準備 1）石蠟切片：依次將切片放入二甲苯 Ⅰ 15 min，二甲苯 Ⅱ 15 min-無水乙醇 Ⅰ 5 min-無水乙醇 Ⅱ 5 min-95 % 乙醇 5 min-85 % 乙醇 5 min-75 % 乙醇 5 min，蒸餾水洗。 2）冰凍切片：冰凍切片固定 10-30 min，PBS 洗 5 min，重復3次，滴加 0.3% triton-X100 破膜液通透 20min，PBS 洗 5 min，重復3次。 3）細胞爬片或者細胞涂片：細胞樣本固定10-30 min ，PBS 洗 5 min 重復 3 次，滴加 0.3% triton-X 100 破膜液通透 20 min，PBS 洗 5 min，重復 3 次。 注： 1）組織所包含細胞數應大于 1000 個。 2）切片厚度建議為 4μm 左右，使用防脫玻片，建議玻片在固定后一周內制備。 3）福爾馬林固定的蠟塊或玻片，大塊組織或TMA,封蠟不能有明顯的破損。 4）組織應當用10% 中性福爾馬林固定，正常固定時間為 18-24h。 5）玻片樣本，組織需要緊貼玻片，避免褶皺，玻片不能有破損、劃傷或污漬。 抗原修復 2.1方式一：檸檬酸修復 1）使用微波爐將載玻片放入 pH 6.0 ，10 mM 檸檬酸鈉緩沖液中煮沸。 2）在低火溫度下保持 10 min（注意補液）。 3）將載玻片放置在臺上，冷卻到室溫，持續 30 min。 2.2 方式二：EDTA修復 1）使用一個微波爐，并將載玻片放入 1 mM EDTA 中煮沸，pH 8.0。 2）在低火下保持 15 min。無需冷卻。 3 阻斷內源性過氧化物酶 1）用 dH2O 清洗切片三次，每次 5 min。 2）切片放入 3 % 過氧化氫水溶液中，孵育 10 min。 3）用 dH2 O清洗兩次，每次 5 min。 4）用 TBST 清洗 5 min。 4 非特異性靶點封閉 1）去除玻片上殘存洗液。 2）用組化筆圈出玻片上的樣本區域，滴加封閉液，浸沒樣本。 3）室溫保濕震蕩10min。 5 一抗孵育 1）去除玻片上殘留液。 2）用移液槍滴加一抗工作液，浸沒樣本區域。 3）室溫保濕震蕩孵育 1 h。 注：孵育時間根據不同抗體進行調整，在濕盒操作避免干燥。 4）用TBST 清洗 3 min，重復一次。 6 HRP二抗孵育 1) 去除玻片上殘留液。 2) 用移液槍滴加 HRP 二抗工作液，浸沒樣本。 3) 室溫震蕩孵育 10 min。 4) 用 TBST 清洗 3 min，重復一次。 7 TSA 熒光染料反應液反應 1) 去除玻片上殘留液。 2) 用 1×Tyramide Amplification Buffer 以 1 : 200 稀釋 TSA 染料，配制成工作液。每個樣品準備 100 μL 染色液。 注：染色液在室溫下避光保存，最長可保存 24 h。 3）在玻片上滴加 100 uL染色工作液,浸沒樣本，室溫保濕震蕩孵育 10 min。 4）在室溫下用 TBST 洗滌 3 次，每次 5 min。 5）微波修復（同上），室溫自然冷卻。 6) 滅菌水洗片1次，1* TBST buffer浸片 2min。 7) 染色結束，封片或繼續染色（從步驟2 開始） 注：

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