描述：
無表面活性劑動物細(xì)胞/組織總蛋白提取試劑盒，由優(yōu)化細(xì)胞裂解液和離心管柱及 2.0ml 接收管組成， 能夠快速從動物細(xì)胞（昆蟲/哺乳動物/其他培養(yǎng)細(xì)胞）和組織（無脊椎動物和脊椎動物）中提取總蛋白。蛋白提取緩沖液中不含任何表面活性劑和 EDTA。試劑盒使用離心管柱專利技術(shù)，樣品量最小可處理 20ul，最大可達(dá) 500ul，解決了用戶起始原料限制的因素。操作時間小于 5 分鐘，產(chǎn)率可到 1-5 mg/ml。

應(yīng)用：
可應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究(LC/MS), IP, ELISA，2D 分析，等電聚焦，SDS-PAGE，immunoblottings 及其他應(yīng)用。試劑盒提供了一個非常快速制備高濃度總蛋白的方法。由于蛋白產(chǎn)量高，且低鹽濃度，提取出的蛋白無需脫鹽和濃縮，即可直接用于下游應(yīng)用。

緩沖液配方：非公開

試劑盒組分

1. 15ml 緩沖液A
2. 15ml 緩 沖 液 B
3. 50 個離心管柱
4. 50 個收集管
5. 4 根塑料研磨棒

儲存：
儲存于 4℃


重要產(chǎn)品信息

 無表面活性劑動物細(xì)胞/組織總蛋白提取試劑盒可以快速提取總蛋白，因此蛋白酶抑制劑不是必須加入，但是如果下游實(shí)驗(yàn)需要較長時間或者蛋白提取后保存較長時間，建議在Buffer A 中添加蛋白酶抑制劑。推薦使用BCA（Pierce）試劑盒用于蛋白濃度測定。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑應(yīng)在使用前加入 Buffer A 中。

所需附加材料
1XPBS
渦旋震蕩儀臺式離心機(jī)
BCA 蛋白定量試劑盒（Pierce, Cat # :23227）
操作方法：
細(xì)胞樣品總蛋白提取

1. 非貼壁細(xì)胞

1. 蛋白提取前，將Buffer 和離心管柱及接收管套管放在冰上預(yù)冷。
2. 低速離心收集細(xì)胞，在離心管中加入 1ml 預(yù)冷的 PBS,3000rpm 離心 2-3 分鐘清洗細(xì)胞。吸去上清，剩余與細(xì)胞體積相同體積的PBS。渦旋震蕩重懸細(xì)胞。
3. 加入表格 1 中相應(yīng)體積的 Buffer A，渦旋震蕩 10-20 秒裂解細(xì)胞。加入同等體積的 Buffer B 到管中震蕩混勻。

請注意：部分未完全裂解的細(xì)胞不會影響樣品質(zhì)量。

4. 將裂解的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的離心管柱套管中，14000-16000rpm 離心 30 秒-1 分鐘取出。棄去離心管柱，將接收管中溶液轉(zhuǎn)移到新的離心管中保存。蛋白提取完成可應(yīng)用于下游實(shí)驗(yàn)。

表格 1，不同細(xì)胞體積應(yīng)加入相應(yīng)體積裂解液

細(xì)胞體積（ul）	緩沖液 A（ul）	緩沖液 B（ul）
5	20	20
10	50	50
20	100	100
30	200	200

﹡ NIH3T3 和 293T 細(xì)胞 10ul 體積相當(dāng)于 1X106 個細(xì)胞