血清鈣離子濃度比色法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

血清鈣離子濃度比色法定量檢測試劑是一種旨在通過甲基百里酚藍，在堿性條件下與鈣離子反應產生藍色復合物，在分光光度儀下通過吸光峰值的變化，即采用比色法來測定樣品中總鈣離子濃度的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種血清或者其它體液樣品中總鈣離子的濃度檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，檢測敏感。

 

技術背景

 

鈣是人體中的一種重要電介質和礦物質，占1150克。其中99％的鈣以氟磷灰石鈣（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細胞內。鈣具有兩種主要形式：一種是非彌散型蛋白結合鈣，其構成約40％至50％的血清中的總鈣含量；另一種為彌散型游離鈣，其進一步分成具有活性的復合鈣（complexed calcium）和離子鈣（ionized calcium）。鈣對神經肌肉興奮性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運輸、釋放神經傳導介質、信使傳導等方面起著重要作用。鈣的檢測包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技術，但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾，或者受限于儀器的特殊的要求。甲基百里酚藍（methylthymol blue；MTB）比色法是一種穩定、簡便、準確、直接的鈣檢測技術。鈣與甲基百里酚藍，在堿性條件下反應產生藍色復合物，在分光光度儀下通過吸光峰值的變化（波長612nm），來定量測定鈣的總濃度。其反應系統為：

OH^-

  Ca^＋＋  +  methylthymol blue   →    Ca-MTB Complex 

 

產品內容

 

緩沖液（Reagent A） 25毫升

反應液（Reagent B）      25毫升

陰性液（Reagent C）     1.5毫升

標準液（Reagent D）     500微升

產品說明書     1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里，避免光照，有效保證3月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管：用于標準樣品和待測樣品操作的容器

5毫升玻璃管：用于尿液樣品制備的容器

微型臺式離心機：用于樣品制備

培養箱：用于反應孵育

比色皿：用于反應的容器

分光光度儀：用于比色分析

 

實驗步驟

 

• 樣品準備

 

選擇一：血清樣品

• 準備好不含抗凝劑的儲存管 
• 抽取1毫升血液，置于儲存管里
• 室溫下，靜置30分鐘，直至血液凝結（注意：血液凝集后，不宜久置）
• 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分（注意：避免觸碰白色液體層）
• 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存

 

選擇二：尿液樣品 

• 準備好5毫升玻璃管
• 移取1毫升液體到玻璃管 
• 調節pH到3至4（注意：使用0.1摩爾鹽酸調節）
• 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到新的5毫升玻璃管 
• 加入2倍容量的用戶自備的無離子水
• 即刻置于冰槽里備用 

 

• 測定準備

 

• 準備好上述制備的待測樣品，置于冰槽里備用
• 設定好分光光度儀：波長612nm，并置零 
• 準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管
• 分別加入100微升緩沖液（Reagent A）到2至5號管
• 移取200微升標準液（Reagent D）到1號管，混勻
• 小心移取100微升1號管的標準液（Reagent D）到2號管，混勻
• 小心移取100微升2號管稀釋的標準液（Reagent D）到3號管，混勻
• 小心移取100微升3號管稀釋的標準液（Reagent D）到4號管，混勻
• 將1至5號管放進冰槽里備用，避免光照；標準管濃度見下表

 

管號	緩沖液（Reagent A）	標準液（Reagent D）	標準鈣濃度
1	--	200微升	6毫摩爾/升
2	100微升	100微升1號管	3毫摩爾/升
3	100微升	100微升2號管	1.5毫摩爾/升
4	100微升	100微升3號管	0.75毫摩爾/升
5	100微升	0	0

 

 

三、（選擇步驟）背景對照測定

 

• 移取500微升緩沖液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
• 加入500微升反應液（Reagent B）
• 加入20微升陰性液（Reagent C）  
• 上下傾倒數次，混勻
• 放進37℃培養箱里孵育5分鐘，避免光照
• 即刻放進分光光度儀（612nm波長）檢測：獲得吸光讀數（OD）

 

• 標準樣品和待測樣品測定

 

• 移取500微升緩沖液（Reagent A）到新的1毫升比色皿
• 加入500微升反應液（Reagent B）
• 加入20微升上述配制的標準液或待測樣品 
• 上下傾倒數次，混勻
• 放進37℃培養箱里孵育5分鐘，避免光照
• 即刻放進分光光度儀（612nm波長）檢測：獲得吸光讀數（OD）
• 實際吸光讀數：標準樣品和待測樣品吸光讀數－背景對照吸光讀數
• 構建標準曲線：縱座標（Y軸）為實際吸光讀數（OD）；橫座標（X軸）為標準鈣濃度（毫摩爾/升）
• 根據標準曲線獲得樣品對應鈣濃度
• 計算樣品實際鈣濃度（注意：計算時，不要遺忘稀釋倍數；例如尿液樣品需要乘上3）

 

【根據標準曲線獲得樣品對應鈣濃度（毫摩爾/升）X 樣品稀釋倍數】＝毫摩爾/升

 

注意事項

 

• 本產品為50次操作，包括標準液
• 操作時，須戴手套
• 檢測過程中，尤其在標準曲線測定過程中，先將所需的緩沖液（Reagent A）和反應液（Reagent B）全部混合后，再移取1毫升工作液進行測定操作，避免操作誤差
• 避免使用EDTA、溴磺酚酞（bromosulfophthalein）、膽紅素（Bilirubin）、對乙酰氨基（acetaminophen）、肼屈嗪（Hydralazine）等，否則干擾檢測
• 建議使用空腹后采集的無溶血現象的血清樣品
• 陳舊血清，尤其出現沉淀的血清，不宜使用
• 血清鈣在室溫下，24小時內成分穩定；4℃條件下，可維持1周；－20℃條件下，可維持5月
• 系統操作過程中，標準液測定只需1次
• 孵育反應完成后即刻進行比色測定
• 比色測定后，比色皿須清洗徹底
• 如果用戶沒有匹配的濾波器，可以使用600nm至650nm之間的任一波長
• 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度
• 檢測敏感度在5微摩爾至4毫摩爾鈣濃度范圍
• 正常血鈣和尿鈣濃度：小于4周新生兒：7.2至11.2毫克/分升；2月至12月嬰兒：8.4至10.8毫克/分升；大于1歲：8.4至10.4毫克/分升；成人：8.6至10.2毫克/分升；尿鈣24小時總量100至320毫克
• 換算：1毫摩爾/升 X  4.01 ＝ 毫克/分升；1毫克/分升＝250微摩爾/升
• 本公司提供系列鈣生化檢測試劑產品

 

質量標準

 

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定檢測敏感

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