小量酵母基因組DNA純化試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

小量酵母基因組DNA純化試劑是一種旨在通過化學(xué)和生物酶裂解、破壁以及蛋白降解等處理來達(dá)到純化DNA的常用技術(shù)方法。其適用于各種真菌或酵母菌株DNA樣品的制備。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，純化程度高。

技術(shù)背景

酵母菌是一種低等單細(xì)胞真核生物，具有細(xì)胞生長(zhǎng)快，易于培養(yǎng)，遺傳操作簡(jiǎn)單明了等原核生物的特點(diǎn)。作為模式生物，它具有比較完備的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制和表達(dá)產(chǎn)物的加工修飾能力，在分子遺傳學(xué)方面認(rèn)識(shí)最早，最先作為外源基因表達(dá)的細(xì)胞宿主。它是一種哺乳動(dòng)物基因調(diào)節(jié)的理想研究工具。酵母基因組DNA純化采用“砸櫥窗搶劫”（smash and grab）的技術(shù)手段，即通過生物酶消解、化學(xué)去污劑裂解，然后是有機(jī)化沉淀等綜合處理而獲得。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）  40毫升

平衡液（Reagent B）  40毫升

溶解液（Reagent C）  20毫升

酶解液I（Reagent D） 200微升

中和液（Reagent E）  20毫升

裂解液（Reagent F）      10毫升

沉淀液（Reagent G）           30毫升

緩沖液（Reagent H）   6毫升

酶解液II（Reagent I） 100微升

酶解液III（Reagent J） 200微升

萃取液（Reagent K）  6毫升

濃縮液（Reagent L）       2毫升

凈化液（Reagent M）      20毫升

保存液（Reagent N）  1毫升

產(chǎn)品說明書      1份

保存方式

保存酶解液I（Reagent D）、酶解液II（Reagent I）、酶解液III（Reagent J）和萃取液（Reagent K）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

2毫升離心管：用于樣品操作的容器

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于沉淀酵母和DNA

渦旋震蕩儀：用于混勻反應(yīng)物

恒溫水槽：用于孵育反應(yīng)物

實(shí)驗(yàn)步驟

• 準(zhǔn)備好2毫升新鮮的酵母菌液（OD600＝1至2；1 X 10⁷細(xì)胞/毫升）
• 移入到2毫升離心管
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入2毫升清理液（Reagent A），混勻
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入2毫升平衡液（Reagent B），混勻
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入800微升溶解液（Reagent C），混勻
• 加入10微升酶解液I（Reagent D）
• 放進(jìn)30℃恒溫水槽孵育30分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升中和液（Reagent E），混勻
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入500微升裂解液（Reagent F），混勻
• 放進(jìn)65℃恒溫水槽孵育15分鐘
• 加入500微升沉淀液（Reagent G），混勻
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘， 速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入300微升緩沖液（Reagent H），混勻
• 加入5微升酶解液II（Reagent I），充分混勻
• 放進(jìn)37℃恒溫水槽孵育30分鐘
• 加入10微升酶解液III（Reagent J），混勻
• 放進(jìn)65℃恒溫水槽孵育30分鐘
• 在室溫下靜置15分鐘
• 加入300微升萃取液（Reagent K）
• 渦旋震蕩儀上震蕩15秒
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移出上層液相溶液到新的1.5毫升離心管，留下25微升相位界面的溶液
• 加入100微升濃縮液（Reagent L）
• 加入800微升沉淀液（Reagent G）
• 在渦旋震蕩儀上震蕩15秒，充分混勻
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升凈化液（Reagent M）
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 空氣中晾干
• 加入30微升保存液（Reagent N）
• 放進(jìn)－20℃冰箱長(zhǎng)期保存

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為20次（2毫升菌液）操作
• 如果制備不同規(guī)格的酵母DNA，可按比例調(diào)整試劑用量
• 操作時(shí)須戴手套
• 酶解液III（Reagent J）可以放進(jìn)37℃恒溫水槽少許時(shí)間，使其凍融
• 本產(chǎn)品采用特殊酶解法，更為有效地提取基因組DNA
• 確保起始酵母菌量
• 本公司提供系列酵母實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純化產(chǎn)量和程度皆高

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