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聚糖對氨基苯甲酰胺（2-AB）熒光標記試劑盒產品說明書（中文版）
主要用途
聚糖對氨基苯甲酰胺（2-AB）熒光標記試劑是一種旨在通過熒光探針對氨基苯甲酰胺和還原性糖分子的末端羧基碳的結合，進而化學還原而產生的標記糖分子，來識別和定量糖分子成分和豐度的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。主要適用于各種寡聚糖的標記制備。產品即到即用，操作簡捷，性能穩定，熒光清晰，高度敏感。
技術背景
聚糖（glycan）是一種缺乏可見光或紫外光吸收特性的生物大分子，因此使用相應的標記分子成為聚糖分子敏感定量檢測分析所必需。運用還原性氨基反應化學（amination chemistry），將釋放出的聚糖分子游離還原末端，標記上熒光探針，以達到純化分離、識別和定量的目的。對氨基苯甲酰胺（2-aminobenzamide；2-AB）是一種熒光標記分子，分子量為136.15，具有紫外（330nm波長）吸收性和熒光特性（激發波長320nm，散發波長420nm）。在標記糖分子中，為非特異性，超敏感（皮摩爾級）、確保糖分子結構完整性和穩定性。標記效率可達85%。首先糖分子處于一種還原形態，染料的胺基團與糖分子的羧基碳之間反應，產生親核性schiff堿配體結構。然后通過化學還原劑進行還原，而獲得標記。
產品內容
標記液（Reagent A） 5管
稀釋液（Reagent B） 500微升
反應液（Reagent C） 5管
溶解液（Reagent D） 500微升
產品說明書 1份
保存方式
保存在-20℃冰箱里，避免潮濕和光照；有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于樣品標記操作的容器
干式恒溫儀：用于反應孵育
離心濃縮儀：用于樣品干燥
實驗步驟
- 樣品準備
- 準備好待測樣品：100皮摩爾至50納摩爾純化還原性寡聚糖
- 如果標記糖蛋白中的寡聚糖分子，建議使用生物酶法分離寡聚糖分子
- 如果標記糖蛋白或寡聚糖中的單糖分子，建議使用肼解法：即使用2摩爾TFA水解中性糖分子或使用4摩爾鹽酸水解氨基糖分子
- 待測樣品須為純化還原性聚糖：不含蛋白、肽、鹽類和去垢劑
- 建議待測樣品經過離心濃縮儀處理或凍干處理為佳
- 建議樣品不得處于高于28℃和極端pH狀態
- 熒光標記
實驗開始前，從-20冰箱里分別取出1管標記液（Reagent A）和反應液（Reagent C），置于室溫下均衡。移取100微升稀釋液（Reagent B）（注意：使用前須凍融和渦旋混勻）到標記液（Reagent A）管里，充分混勻后，加入到反應液（Reagent C）管里，充分混勻，標記為標記工作液，避免光照（注意：須在1小時內使用）。然后進行下列操作。
- 移取100微升待測樣品（100皮摩爾至50納摩爾/100微升）到1.5毫升離心管
- 放進離心濃縮儀離心干燥
- 加入5微升標記工作液
- 用20微升槍頭抽吸混勻
- （選擇步驟）渦旋震蕩15分鐘
- 放進微型臺式離心機瞬時離心8秒
- 放進65℃干式恒溫儀孵育3小時，避免光照
- 室溫下靜置10分鐘均衡溫度
- 放進離心濃縮儀離心干燥
- 即刻加入10微升溶解液（Reagent D）或用戶自備的溶解液，混勻
- （選擇步驟）如果暫時停止，可以保存在-70℃冰箱里
- 繼續后續操作
注意事項
- 本產品為20次間斷操作或100次連續操作
- 本產品可以標記低達5皮摩爾純化單糖分子
- 操作時，須戴手套
- 稀釋液（Reagent B）使用前，確保凍融，可以在37℃溫育數分鐘，然后渦旋混勻后加入標記液（Reagent A）試劑中
- 如果反應液（Reagent C）難以溶解，可以置于65℃3分鐘，其間槍頭混勻，直至完全溶解
- 建議標記樣品量為100皮摩爾至50納摩爾/100微升
- 標記工作液不宜保存
- 標記產物分子量計算：MW（glycan）+MW（2-AB；136.15）－16
- 本公司提供系列糖蛋白分析試劑產品
質量標準
- 本產品經鑒定性能穩定
- 本產品經鑒定熒光清晰
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