免疫組化辣根過氧化酶/四甲基聯苯胺顯色試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

免疫組化辣根過氧化酶/四甲基聯苯胺（HRP-TMB）顯色試劑是一種旨在通過過氧化物酶的催化，底物四甲基聯苯胺氧化形成藍色沉淀產物，以此鑒定過氧化物酶活性，進而確定目標分子表達的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于辣根過氧化酶標記的免疫組織化學檢測和原位雜交等。產品即到即用，性能穩定，操作便捷，敏感度高，顯色清晰，重復性好。

技術背景

四甲基聯苯胺（3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine；TMB）是過氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在過氧化物酶的催化下，電子供體TMB底物在過氧化氫氧化下失去電子，產生游離自由陽離子單電子氧化產物，在pH4.9條件下，呈現出顏色變化和沉積，形成藍色沉淀產物，且不受乙醇影響。被用于檢測過氧化物酶的活性，靈敏度高，特異性好。

產品內容

清理液（Reagent A） 20毫升

染色液（Reagent B）  5毫升

終止液（Reagent C）     5毫升

產品說明書      1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；長期不用，保存染色液（Reagent B）在—20℃冰箱里，避免光照；終止液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證3月

用戶自備

無離子水：用于清洗染色后的樣品

中性紅復染試劑盒（80068）：用于常規染色后復染

光學顯微鏡：用于組化染色后觀察分析

酶標儀：用于比色定量檢測

實驗步驟

• 免疫組化染色

• 準備好含有待測蛋白的組織切片：包括固著、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標記的二抗（或鏈霉親和素）處理等步驟
• 加上100微升清理液（Reagent A），鋪滿整個切片樣品表面
• 小心移去清理液
• 重復實驗步驟2至3三次
• 小心加上100微升染色液（Reagent B），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5至15分鐘，或直至樣本出現藍色，避免光照
• 小心移去切片上的染色液（Reagent B）
• 加上200微升用戶自備的無離子水，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘
• 小心移去切片上的無離子水
• （選擇步驟）進行中性紅復染（注意：建議使用中性紅復染試劑盒－80068）
• 后續常規透明處理
• 放上蓋玻片或中性樹脂封片
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：陽性呈現亮藍色

• ELISA染色

• 準備好待測的ELISA酶標板：包括樣品結合、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標記的二抗（或鏈霉親和素）處理等步驟
• 加入100微升清理液（Reagent A）
• 小心移去清理液
• 重復實驗步驟2至3三次
• 小心加入100微升的染色液（Reagent B） 
• 室溫下孵育30分鐘，避免光照（注意：可見藍色沉淀）
• 即刻放進酶標儀測讀：波長650nm
• 加入100微升終止液（Reagent C） 
• 輕輕搖勻酶標板（注意：陽性樣品呈現黃色）
• 即刻放進酶標儀測讀：波長450nm

注意事項

• 本產品為50次操作
• 本產品較之二氨基聯苯胺（DAB）等染色，敏感10至20倍
• 操作時，須戴手套
• 終止液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全
• 染色時間可以根據情況調整，以免造成過度染色或背景過深
• 如果封閉欠佳，易造成背景顏色過深
• 本產品只能用于辣根過氧化酶（HRP）標記的組織化學沉淀反應和原位雜交，不適合于免疫印跡染色
• 染色后可用中性紅復染，增強對照；建議使用中性紅復染試劑盒－80068
• 如果染色過快或過深，建議稀釋一抗和二抗濃度
• 如果用戶沒有650nm的濾波器，可以使用630至650之間的任一波長
• 使用終止液（Reagent C）后，其敏感度（即吸光讀數）將會增加2至3倍
• 使用終止液（Reagent C）后1小時內，須完成測讀，否則其吸光讀數將降低10％
• 本公司提供系列免疫組化染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰

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