可溶性動物軟組織膜蛋白（粗提）制備試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

可溶性動物軟組織膜蛋白（粗提）制備試劑是一種旨在使用物理或化學方法快速充分裂解動物組織，并在蛋白酶抑制混合劑的幫助下，通過超速離心，分離和收集所有可溶性組織細胞膜蛋白質（完整蛋白和跨膜蛋白以及膜相關蛋白等）的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種軟組織（動物、人體）等樣品。可直接用于特定蛋白后續純化、酶譜分析、二維蛋白電泳、西方雜交、免疫沉淀、功能鑒定和質譜分析以及蛋白組學研究等。產品即到即用，性能穩定，操作便捷，收集效果顯著。

技術背景

通過物理勻漿和化學裂解以及蛋白酶抑制混合劑的共同作用，既防止裂解后動物組織內各種活性蛋白成分遭到活化的內源性蛋白酶的破壞，充分保留組織細胞膜蛋白的免疫和生物學活性，又確保膜蛋白（完整蛋白integral protein和跨膜蛋白transmembrane protein）的高產萃取。

產品內容

清理液（Reagent A） 100毫升

裂解液（Reagent B） 100毫升

活性液（Reagent C） 100微升

強化液（Reagent D）  10毫升

保存液（Reagent E）  30毫升

產品說明書   1份

保存方式

保存活性液（Reagent C）在-20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

4℃臺式離心機：用于樣品操作

組織勻漿器：用于組織細胞裂解

實驗步驟

實驗開始前，將試劑盒里的活性液（Reagent C）從－20℃的冰箱里取出，放進冰槽里凍融，然后移出5毫升裂解液（Reagent B）到15毫升離心管，加入5微升活性液（Reagent C），充分混勻，置于冰槽里，標記為裂解工作液。然后進行下列操作。

一、組織勻漿法

• 手術取出動物組織，并秤重以確定1克組織重量
• （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入5毫升清理液（Reagent A）清洗1次
• 即刻用刀片切碎組織
• 放進一個預冷的15毫升錐形離心管
• 加入預冷的5毫升裂解工作液
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器
• 在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80下）（注意：參見注意事項7）
• 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g
• 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管
• 放進4℃臺式離心機離心30分鐘，速度為10000g
• 小心抽去上清液，保留沉淀顆粒
• 加入1毫升預冷的保存液（Reagent E）
• 放進4℃臺式離心機再次離心5分鐘，速度為10000g
• 小心抽去上清液
• 加入500微升保存液（Reagent E），充分混勻
• 即刻移入1.5毫升離心管
• 放進－70℃冰箱里保存
• 或放進冰槽里，繼續后續（蛋白定量、西方雜交、免疫沉淀等）操作

二、化學處理法

• 手術取出動物組織，并秤重以確定1克組織重量
• （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入5毫升清理液（Reagent A）清洗1次
• 移入一個液氮凍存管
• 即刻放入液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
• 放進一個15毫升錐形離心管
• 加入預冷的5毫升裂解工作液
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 在冰槽里孵育2分鐘，期間渦旋震蕩5秒一次
• 加入預冷的500微升強化液（Reagent D）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 在冰槽里孵育5分鐘，期間渦旋震蕩5秒二次（注意：參見注意事項8）
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g
• 小心移出上清液到新的預冷的15毫升錐形離心管
• 放進4℃臺式離心機離心30分鐘，速度為10000g
• 小心抽去上清液，保留沉淀顆粒
• 加入1毫升預冷的保存液（Reagent E）
• 放進4℃臺式離心機再次離心5分鐘，速度為10000g
• 小心抽去上清液
• 加入500微升保存液（Reagent E），充分混勻
• 放進－70℃冰箱里保存
• 或放進冰槽里，繼續后續（蛋白定量、西方雜交、免疫沉淀等）操作

注意事項

• 本產品為20次操作
• 操作時，須戴手套
• 待測組織樣品為1克重量
• 根據組織重量的不同，按比例調整試劑用量
• 所有操作均須在4℃狀態下進行
• 對于難以裂解的組織，采用物理勻漿法是優先推薦的技術處理
• 通常勻化次數為80下達到80％的組織細胞裂解為理想狀態，但不同的組織細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的組織細胞裂解程度：完整組織細胞呈現發亮的圓環。低于50％可以增加勻化次數
• 通常孵育5分鐘達到80％的組織細胞裂解為理想狀態，但不同的組織細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的組織細胞裂解程度：完整組織細胞呈現發亮的圓環。低于50％可以增加孵育時間和渦旋震蕩次數
• 通常1克組織可獲得10至100微克膜蛋白
• 制備產物如果放在－70℃冰箱里儲存備用，避免反復凍融
• 如果用戶需要高質純化組織膜蛋白，建議使用可溶性動物軟組織膜蛋白（純提）制備試劑盒（30041.2）或可溶性動物軟組織膜蛋白相位分離制備試劑盒（30041.3）
• 本公司提供系列蛋白制備試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無蛋白酶污染

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