純化線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

純化線粒體可溶性總蛋白制備試劑是一種旨在通過化學裂解處理，并在蛋白酶抑制混合劑的幫助下，使已純化的線粒體膜結構破裂而獲得線粒體內活性蛋白酶系統的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種純化線粒體（動物、人體、植物、昆蟲等）的內容物預制備�？梢员挥糜诩毎�凋亡、信號傳遞、古生物、衰老、代謝和營養學等的研究�？芍苯佑糜谔囟ǖ鞍缀罄m純化、蛋白一維或二維電泳、西方雜交、免疫抗體和質譜分析等等。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

線粒體是細胞中重要的細胞器，其主要功能是提供細胞內各種物質代謝所需要的能量。線粒體中含有豐富的細胞色素氧化酶系統和細胞凋亡相關蛋白等。通過特殊裂解液和蛋白酶抑制混合劑可以防止裂解后線粒體內各種活性蛋白成分遭到活化的內源性蛋白酶的破壞，充分保留線粒體內蛋白質的免疫和生物學活性，可以進行相關蛋白的獨立分析。

產品內容

裂解液（Reagent A）       2毫升

活性液（Reagent B）     20微升

上樣液（Reagent C）   3毫升

產品說明書      1份

保存方式

保存活性液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

動物細胞/組織線粒體粗提分離試劑盒（10006.1）：用于獲得線粒體成分

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

（微型）臺式離心機：用于樣品操作

渦旋震蕩儀：用于混勻

實驗步驟

實驗開始前，從－20℃冰箱里取出活性液（Reagent B），置于冰槽里融化。然后移取100微升裂解液（Reagent A）和1微升活性液（Reagent B）到1.5毫升離心管，混勻后，標記為裂解工作液，置于冰槽里備用。然后進行下列操作。

• 從－70℃冰箱里取出線粒體顆粒樣品，放進冰槽里（注意：參見注意事項4）
• （選擇步驟）如果線粒體樣品不是顆粒狀態，而是液體狀態且容積過大，放進4℃臺式離心機離心20分鐘，離心速度為10000g
• （選擇步驟）小心抽去上清液
• 加入100微升裂解工作液到線粒體顆粒樣品中
• 渦旋震蕩15秒
• 放進冰槽中孵育15分鐘
• 渦旋震蕩60秒
• 放進微型臺式離心機離心2分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管――此為所有可溶性線粒體蛋白系統
• 若暫時不予后續處理，保存在－20℃冰箱里
• 繼續進行下列操作：

操作一、線粒體總蛋白定量檢測

1） 移取10微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用 Bradford蛋白質濃度定量試劑盒－30030.1）

操作二、可溶性線粒體蛋白電泳

1） 移取20微升（1微克/微升）上清液到新的1.5毫升離心管

2） 加入20微升上樣液（Reagent C）

3） 渦旋震蕩15秒

• 放進微型臺式離心機離心10秒，速度為500g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 煮沸5分鐘

6） 上樣，進行電泳操作和西方雜交

注意事項

• 本產品為20次操作
• 操作時，須戴手套
• 整個操作過程須在4℃條件下進行
• 建議使用10⁸細胞或1克組織的線粒體量；推薦使用動物細胞/組織線粒體粗提分離試劑盒（10006.1）
• 如果線粒體樣品的液體容量少于50微升，可直接加入100微升裂解工作液進行操作，無需再次超速離心
• 如果需檢測不可溶性線粒體蛋白，可保留線粒體裂解后的沉淀物，直接加入10微升上樣液（Reagent C）和10微升無離子水，然后繼續操作二的步驟3至6
• 線粒體蛋白須放在－70℃冰箱里儲存備用，避免反復凍融
• 本公司提供系列線粒體試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無蛋白酶污染
• 本產品經鑒定蛋白萃取產量高
• 本產品經鑒定純化程度高

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