免疫組化堿性磷酸酶－對甲苯胺蘭溴氯吲哚磷酸/硝基藍四氮唑顯色試劑盒

產品說明書（中文版）

主要用途

免疫組化堿性磷酸酶－對甲苯胺蘭溴氯吲哚磷酸/硝基藍四氮唑（AP-BCIP/NBT）顯色試劑是一種旨在通過堿性磷酸酶的催化，底物對甲苯胺蘭溴氯吲哚磷酸的水解，以及隨后硝基藍四氮唑的還原形成紫黑色或藍黑色沉淀產物，以此鑒定堿性磷酸酶活性，進而確定目標分子表達的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于堿性磷酸酶標記的免疫組織化學檢測和原位雜交等。產品即到即用，性能穩定，操作便捷，敏感度高，顯色清晰，重復性好。

技術背景

對甲苯胺蘭-5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸（5-Bromo-4-Chloro-3'-Indolyphosphate p-Toluidine Salt；BCIP）的磷酸酯（phosphate ester）受到堿性磷酸酶的水解，產生強力的還原產物，進而還原硝基藍四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）便產生不溶性紫黑色或藍黑色甲暨色素。據此用于檢測堿性磷酸酶的活性，靈敏度高，特異性好。

產品內容

清理液（Reagent A） 25毫升

染色液（Reagent B）     200微升

產品說明書      1份

保存方式

保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在在4℃冰箱里；染色液（Reagent B），避免光照；有效保證6月

用戶自備

無離子水：用于清洗染色后的樣品

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

核固紅復染試劑盒（GMS40011）：用于常規染色后復染

光學顯微鏡：用于組化染色后觀察分析

實驗步驟

實驗開始前，移取1毫升清理液（Reagent A）到1.5毫升離心管，加入40微升染色液（Reagent B），混勻后，標記為染色工作液，避免光照。然后進行下列操作。

• 準備好含有待測蛋白的組織切片：包括固著、封阻、一抗（或生物素）處理、堿性磷酸酶（AP）標記的二抗（或鏈霉親和素）處理等步驟
• 加上100微升清理液（Reagent A），鋪滿整個切片樣品表面
• 小心移去清理液
• 重復實驗步驟2至3三次
• 小心加上100微升染色工作液，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育15至30分鐘，或直至樣本出現藍色，避免光照
• 小心移去切片上的染色工作液
• 加上200微升用戶自備的無離子水，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘
• 小心移去切片上的無離子水
• （選擇步驟）進行核固紅復染（注意：建議使用核固紅復染試劑盒－GMS40011）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：陽性呈現藍黑色或紫黑色

注意事項

• 本產品為50次操作
• 操作時，須戴手套
• 染色時間可以根據情況調整，以免造成過度染色或背景過深
• 如果封閉欠佳，易造成背景顏色過深
• 本產品只能用于堿性磷酸酶（AP）標記的組織化學沉淀反應和原位雜交，不適合于免疫印跡染色
• 染色后可用核固紅復染，增強對照；建議使用核固紅復染試劑盒－GMS40011
• 如果染色過快或過深，建議稀釋一抗和二抗濃度
• 避免使用有機溶劑類封片
• 本公司提供系列免疫組化染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰

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