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冰凍切片組織琥珀酸脫氫酶活性染色試劑盒產品說明書（中文版）
主要用途
冰凍切片組織琥珀酸脫氫酶（SDH）活性染色試劑是一種旨在使用合成電子受體四氮唑蘭染料，通過反應系統的作用，組織樣本中酶活性部位呈現出藍黑色沉淀現象的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種動物組織冰凍切片樣品琥珀酸脫氫酶的活性檢測。用于衰老、能量代謝、蛋白組學、病理生理學、神經病變等研究。產品不含污染性蛋白酶，嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，反應優化，顯色清晰。
技術背景
琥珀酸脫氫酶（succinnate dehydrogenase；SDH；EC 1.3.99.1）是三羧酸循環（tricarboxylic acid cycle；TCA）或Krebs循環中與細胞線粒體膜相關的重要元素，位于線粒體內膜，參與細胞呼吸鏈。琥珀酸脫氫酶由27kd和70kd兩個單體組成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反應，產生延胡索酸（furmarate），通過黃素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Adenine Dinucleotide；FAD）傳遞電子。基于琥珀酸脫氫酶的反應原理，使用人工電子受體染料硝基藍四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT），接受來自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸（Reduced flavin Adenine Dinucleotide；FADH2）的電子，而被還原，產生不溶性藍色或藍黑色甲暨色素。據此證明組織細胞琥珀酸脫氫酶的活性。
產品內容
清理液（Reagent A） 100毫升
染色液（Reagent B） 10毫升
反應液（Reagent C） 1毫升
固著液（Reagent D） 10毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存染色液（Reagent B）和反應液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月
用戶自備
1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器
培養箱：用于反應孵育
中性樹脂：用于切片封片
光學顯微鏡：用于切片染色后觀察分析
實驗步驟
染色開始前，將－20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化；移取900微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升離心管，加入100微升反應液（Reagent C），混勻后，標記為染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后進行下列操作。
- 取出待測的10微米厚的冰凍組織切片
- 小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個樣品表面
- 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
- 小心加上200微升 染色工作液，鋪滿整個切片樣品表面
- 放進37℃培養箱里孵育10分鐘，避免光照
- 小心移去切片上的染色工作液
- 小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
- 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
- 重復實驗步驟7至8二次
- 小心加上200微升固著液（Reagent D）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
- 室溫下孵育15分鐘
- 小心移去切片上的固著液（Reagent D）
- 小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
- 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
- 重復實驗步驟13至14二次
- 放上蓋玻片或封片（中性樹脂）
- 即刻在光學顯微鏡下觀察和計數：表達琥珀酸脫氫酶活性的組織細胞為陽性組織細胞，呈現藍黑色。
注意事項
- 本產品為50次操作
- 操作時，須戴手套
- 反應液（Reagent C）避免反復凍融
- 陰性對照時，GENMEN染色工作液不含有反應液（Reagent C）
- 可以使用50毫摩爾丙二酸鈉（Sodium malonate）作為抑制劑
- 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
- 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
- 整個操作，在避光狀態下進行
- 染色孵育時間，根據樣品和酶活性強弱調整，通常為5至30分鐘
- 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察
- 樣品染色后保存，避免光照
- 本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產品
質量標準
- 本產品經鑒定性能穩定
- 本產品經鑒定顯色清晰
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