石蠟切片紅氨酸（RUBEANIC ACID）銅染色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

石蠟切片紅氨酸（RUBEANIC ACID）銅染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)脫蠟方法和紅氨酸結(jié)合銅蛋白反應(yīng)技術(shù)，分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中銅沉積現(xiàn)象的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的銅分子檢測(cè)。廣泛用于肝組織病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

細(xì)胞漿里含有以結(jié)合蛋白形式的銅分子，然而過多銅分子的存在將產(chǎn)生毒性作用，尤其在肝臟組織，導(dǎo)致急性肝炎、晚期肝纖維化和慢性漸進(jìn)性梗阻性黃疸等。遺傳性威爾遜氏癥（Wilson’s disease）為典型肝內(nèi)銅增多癥。紅氨酸（rubeanic acid），又稱為二硫代草酰胺（dithiooxamide），分子式為C₂H₄N₂S₂，分子量120.19，一種草酰胺硫類似物（sulfur analog）的螫合劑（chelating agent），與銅蛋白具有強(qiáng)力親和性。一旦反應(yīng)，產(chǎn)生深綠色沉積，以證明銅分子的存在。與羅丹寧染色比較，紅氨酸染色更為穩(wěn)定持久。

產(chǎn)品內(nèi)容

脫蠟液（Reagent A）         300毫升

補(bǔ)水液A（Reagent B）  100毫升

補(bǔ)水液B（Reagent C）  100毫升

補(bǔ)水液C（Reagent D）  100毫升

補(bǔ)水液D（Reagent E）  100毫升

清理液（Reagent F）   50毫升

染色液（Reagent G）   50毫升

稀釋液（Reagent H）   50毫升

產(chǎn)品說明書    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，密閉瓶蓋；染色液（Reagent G），避免光照； 有效保證3月

用戶自備

小型染色缸：用于石蠟切片的去石蠟和染色操作

培養(yǎng)箱或烘箱：用于脫蠟或染色孵育操作

光學(xué)顯微鏡：用于組織細(xì)胞染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 脫蠟處理

• 取出10片待測(cè)的5微米厚石蠟包埋的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，此步很重要）
• （選擇步驟）放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
• （選擇步驟）室溫下靜置15分鐘
• 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

• 小心移去切片上的補(bǔ)水液D（Reagent E）
• 小心加上200微升清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F） 

• 樣本染色處理

操作開始前，將4℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent G）置入室溫下預(yù)熱。準(zhǔn)備1個(gè)50毫升小型染色缸，移取25毫升充分搖勻的染色液（Reagent G）到染色缸里，加入25毫升稀釋液（Reagent H），混勻后靜置，標(biāo)記為染色工作液，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

• 小心將切片置入50毫升染色工作液中（注意：確保整個(gè)切片樣品浸泡在工作液里）
• 在室溫下孵育24至72小時(shí)
• 取出切片，小心移去切片上的染色工作液 
• 小心將切片置入50毫升補(bǔ)水液B（Reagent C）（注意：確保整個(gè)切片樣品浸泡在補(bǔ)水液里）
• 在室溫下孵育3小時(shí)
• 小心將切片置入50毫升補(bǔ)水液A（Reagent B）（注意：確保整個(gè)切片樣品浸泡在補(bǔ)水液里）
• 在室溫下孵育3至24小時(shí)
• 取出切片，小心移去切片上的補(bǔ)水液A（Reagent B）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：銅沉積陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)深綠色（24小時(shí)孵育）或黑色（72小時(shí)孵育）

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 試劑具有揮發(fā)性，注意用后密閉瓶蓋
• 石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，否則造成樣品支離破碎
• 染色液（Reagent G）具有不溶性顆粒，使用前，須搖勻，使顆粒均勻分布在溶液里
• 染色工作液不宜長(zhǎng)期久放
• 正常肝或脾臟組織含有大量銅，可以作為陽(yáng)性對(duì)照
• 可以使用蘇木素復(fù)染試劑盒（80067）
• 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列組織細(xì)胞金屬元素染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

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