全組織衰老特異性脂褐素靛酚原位染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

主要用途

全組織衰老特異性脂褐素靛酚原位染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)固著方法和非離子化染料靛酚溶解氧化技術(shù)，分析新鮮全組織樣品中脂褐素沉積現(xiàn)象，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到紅色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老（replicative senescence）的分子特征來(lái)識(shí)別和探測(cè)衰老細(xì)胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于人體和動(dòng)物組織的脂褐素檢測(cè)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。  

技術(shù)背景

細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長(zhǎng)潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期，表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細(xì)胞衰老的特征性生物學(xué)標(biāo)記。脂褐素（lipofusin），又稱為“磨損（wear and tear）”色素，是一種細(xì)胞內(nèi)與年齡相關(guān)的熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細(xì)胞的繼發(fā)性溶酶體內(nèi)。脂褐素常見于老年人的永恒性非分裂性組織細(xì)胞里，例如心臟、肝臟和神經(jīng)等，尤其在衰老誘導(dǎo)的細(xì)胞退變中聚集增多，特別是萎縮的組織。脂褐素來(lái)自于氧化的蛋白和脂質(zhì)，成為細(xì)胞衰老中后期的獨(dú)立指征。染料二氯酚靛酚（2,6-Dichlorobenzenone-indophenol或2,6-Dichlorophenolindophenol）經(jīng)過(guò)酸化處理還原且非離子化，具有脂溶性，特異性染色組織細(xì)胞中的脂褐素，除人體心肌組織和小鼠腦組織外。同時(shí)使紅細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）  120毫升

固定液（Reagent B）   30毫升

染色液（Reagent C）   30毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書           1份

保存方式

保存染色液（Reagent C）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里； 染色液（Reagent C）避免光照；有效保證6月

用戶自備

光學(xué)顯微鏡：用于觀察染色后的組織細(xì)胞

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開始前，從－20℃冰箱里取出染色液（Reagent C），在室溫下融化，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

• 準(zhǔn)備1個(gè)6孔細(xì)胞培養(yǎng)板
• 放進(jìn)新鮮切除的動(dòng)物組織樣本（注意：建議組織大小為0.5厘米厚，1厘米長(zhǎng)；如果過(guò)大，最好刀切處理一下）
• 將組織壓平
• 小心加入3毫升清理液（Reagent A），清洗組織樣本
• 小心抽去清理液
• 小心加入3毫升固定液（Reagent B），浸沒(méi)整個(gè)組織
• 在室溫下孵育1小時(shí)
• 小心抽去固定液
• 小心加入3毫升清理液（Reagent A），清洗組織樣本
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去清理液
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至11一次
• 小心加入3毫升染色液（Reagent C），浸沒(méi)整個(gè)組織
• 在室溫下孵育10分鐘，或直至可見紅色，避免光照
• （選擇步驟）小心抽去染色液
• （選擇步驟）小心加入3毫升清理液（Reagent A），清洗組織樣本（注意：參見注意事項(xiàng)5）
• 壓片
• 在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：脂褐素陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)紅色，非脂褐素細(xì)胞呈現(xiàn)無(wú)色、藍(lán)色或淡粉紅色
• 后續(xù)石蠟切片（6微米厚）或冰凍切片（10微米厚）

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為10次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 使用時(shí)，避免污染母液
• 染色液（Reagent C）避免光照；由于溶液較酸，操作時(shí)注意安全
• 染色后可以使用清理液（Reagent A）清洗，但不宜過(guò)久，否則容易褪色
• 切片制片處理忌用極性脂類溶劑，例如乙醇等，否則會(huì)去除色素
• 本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰 

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