特殊石蠟切片組織衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位直接染色試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

主要用途

特殊石蠟切片組織衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位直接染色試劑是一種旨在使用特殊脫蠟處理和脂溶性偶氮染料蘇丹黑B技術(shù)，分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中（最大程度保留的）脂褐素沉積現(xiàn)象，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到黑色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老（replicative senescence）的分子特征來(lái)識(shí)別和探測(cè)衰老細(xì)胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的早期脂褐素檢測(cè)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。  

技術(shù)背景

細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長(zhǎng)潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期，表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細(xì)胞衰老的特征性生物學(xué)標(biāo)記。脂褐素（lipofusin），又稱為“磨損（wear and tear）”色素，是一種細(xì)胞內(nèi)與年齡相關(guān)的棕黃色熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細(xì)胞的繼發(fā)性溶酶體內(nèi)。脂褐素常見(jiàn)于老年人的永恒性非分裂性組織細(xì)胞里，例如心臟、肝臟和神經(jīng)等，尤其在衰老誘導(dǎo)的細(xì)胞退變中聚集增多，特別是萎縮的組織。脂褐素來(lái)自于氧化的蛋白和脂質(zhì)，成為細(xì)胞衰老中后期的獨(dú)立指征。蘇丹黑B（SUDAN BLACK B），又稱為二氫二甲基苯基偶氮萘偶氮嵌間二氮雜苯（2，3－dihydro－2，2－dimethyl－6－（4－phynylazo）－1－naphthyl）azo）1H－perimidine），是一種脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME DIAZO DYE）。其分子式為C26H24N4O，分子量為408.51。脂褐素分為早期和晚期，早期脂褐素的脂質(zhì)特性與脂溶性蘇丹黑B染料發(fā)生反應(yīng)，顯示黑色。同時(shí)使紅細(xì)胞呈現(xiàn)黑色。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過(guò)程中，有機(jī)溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質(zhì)成分，因此使用非二甲苯類脫蠟，以最大程度保護(hù)組織中的脂質(zhì)成分是蘇丹黑染色的關(guān)鍵。

產(chǎn)品內(nèi)容

脫蠟液（Reagent A）          50毫升

凈化液（Reagent B）   10毫升

清理液（Reagent C）   30毫升

染色液（Reagent D）  100毫升

澄清液（Reagent E）  150毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書           1份

保存方式

保存在4℃冰箱里； 染色液（Reagent D）避免光照，瓶蓋密閉；有效保證6月

用戶自備

烘箱：用于石蠟切片處理

小型染色缸：用于樣品操作的容器

光學(xué)顯微鏡：用于觀察染色后的組織細(xì)胞

實(shí)驗(yàn)步驟

• 脫蠟處理

• 取出待測(cè)的6微米厚的石蠟包埋的組織切片
• 放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• 小心加上500微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至6一次
• 小心加上200微升凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的凈化液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent C）

二、 樣本染色處理

• 準(zhǔn)備1個(gè)50或100毫升小型染色缸
• 加入適量的染色液（Reagent D）到小型染色缸里
• 小心放進(jìn)上述脫蠟處理的切片（注意：確保切片浸泡在染色液（Reagent D））
• 室溫下孵育16小時(shí)，避免光照（注意：參見(jiàn)注意事項(xiàng)6和7）
• 取出切片，小心移去切片上的染色液（Reagent D） 
• 室溫下，小心將切片置入50毫升澄清液（Reagent E）中5次（2秒/次）（注意：直至切片顏色呈現(xiàn)灰色）
• 輕輕移去切片上的澄清液（Reagent E），或空氣中晾干 
• 小心加上200微升清理液（Reagent C）
• 小心移去切片上的清理液（Reagent C）
• 放上蓋玻片或封片（水相或中性樹(shù)脂） 
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：脂褐素陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)黑色，紅細(xì)胞呈現(xiàn)黑色，背景呈現(xiàn)不同程度灰色

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 本產(chǎn)品不適合于含有紅細(xì)胞的樣本
• 建議用戶避免使用常規(guī)石蠟包埋組織切片，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理
• 使用時(shí)，避免污染母液
• 染色液（Reagent D）避免光照
• 染色時(shí)，染色缸須密閉，至關(guān)重要
• 染色后清洗不宜過(guò)度，否則容易褪色
• 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
• 本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰 

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