蛋白質硝酸銀染色試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

蛋白質硝酸銀染色試劑是一種旨在使用硝酸銀通過固著、清洗和染色，直接在聚丙烯酰胺凝膠上顯色，在清晰背景上產生靈敏度10納克以下蛋白質的銀色條帶的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于蛋白電泳包括IEF的檢測。產品即到即用，性能穩定，操作便捷，敏感度高，顯色清晰，重復性好。

 

技術背景

 

硝酸銀（AgNO3）的銀離子與蛋白質結合后，化學還原成可見的金屬銀，而顯示染色效果。通常用于蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳的檢測。可與質譜分析兼容。

 

產品內容

 

固著液（Reagent A） 250毫升

處理液（Reagent B） 750毫升

凈化液（Reagent C） 500毫升

染色液A（Reagent D）  10毫升

染色液B（Reagent E） 100毫升

顯色液A（Reagent F）      2.5毫升

顯色液B（Reagent G） 250微升

終止液（Reagent H） 500毫升

脫色液A（Reagent I）  25毫升

脫色液B（Reagent J）  25毫升

產品說明書      1份

 

保存方式

 

保存染色液A（Reagent D）和染色液B（Reagent E）在4℃冰箱里，避免光照，其余的保存在室溫下，有效保證6月

 

用戶自備

 

100毫升錐形離心管：用于配制染色工作液的容器

塑料盤：用于染色的容器

無離子水：用于稀釋試劑盒溶液

平式搖蕩儀：用于染色操作時的孵育

 

 

 

實驗步驟

 

實驗開始前，完成SDS-PAGE蛋白電泳的運行，取出6cm X 8cm 的膠體，作好定向標記，然后進行下列操作：

 

• 固著處理

 

• 準備5個100毫升的燒杯，作好1至5號標記
• 抽取25毫升固著液（Reagent A）到1號燒杯，加入25毫升無離子水，混勻
• 加入到8cm X 10cm 大小的染色盤
• 將聚丙烯酰胺凝膠放進染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育30分鐘，速度為50RPM
• 同時抽取75毫升處理液（Reagent B）到2號燒杯，加入75毫升無離子水，混勻
• 小心倒掉染色盤里的固著液（Reagent A）
• 加入50毫升2號燒杯里稀釋的處理液（Reagent B）
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育15分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的處理液（Reagent B）
• 重復實驗步驟8至10兩次
• 同時抽取50毫升凈化液（Reagent C）到3號燒杯，加入50毫升無離子水，混勻
• 加入50毫升3號燒杯里稀釋的凈化液（Reagent C）到染色盤
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育15分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的凈化液（Reagent C）
• 重復實驗步驟13至15一次

 

• 染色處理

 

染色開始前，移取640微升染色液A（Reagent D）到新的50毫升錐形離心管，然后一滴一滴加入染色液B（Reagent E）（約6.2至6.4毫升），直至溶液澄清，最后加入無離子水到50毫升，混勻后，標記為染色工作液，即可使用。

 

• 直接抽取50毫升含有染色液A（Reagent D）和染色液B（Reagent E）的染色工作液，加入到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育15分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的染色工作液
• 加入50毫升用戶自備的無離子水
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育5分鐘，速度為50RPM
• 小心倒掉染色盤里的無離子水
• 重復實驗步驟4至6一次

 

• 顯色處理

 

• 同時抽取50毫升無離子水到4號燒杯
• 加入250微升顯色液A（Reagent F）和25微升顯色液B（Reagent G），混勻，標記為顯色工作液
• 加入50毫升4號燒杯里的顯色工作液到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育1至10分鐘，速度為50RPM
• 蛋白質銀色條帶開始顯現（注意：顯色不要過深）
• 小心倒掉染色盤里的顯色工作液（注意：如果染色過深，參見實驗步驟四）
• 直接加入25毫升終止液（Reagent H），直至完成所有拍照和分析

 

• 脫色處理

 

• 如果染色過深， 移出2.5毫升脫色液A（Reagent I）和2.5毫升脫色液B（Reagent J）到5號燒杯，加入45毫升無離子水，混勻，標記為脫色工作液
• 加入脫色工作液到染色盤里
• 室溫下，在平式搖蕩儀上孵育，速度為50RPM，直至條帶顏色回到滿意狀態
• 小心倒掉染色盤里的脫色工作液
• 加入50毫升無離子水清洗

 

• 質譜分析預處理

 

• 如果需要進行質譜分析，移出5微升脫色液A（Reagent I）和5微升脫色液B（Reagent J）到1.5毫升離心管，加入90微升無離子水，混勻
• 小心切下蛋白條帶凝膠體
• 放進1.5毫升離心管，直至條帶完全脫色

 

注意事項

 

• 本產品為10 X 50毫升規格
• 每50毫升試劑盒溶液可用于處理6cm X 8cm大小膠體；膠體越大，用量增加
• 操作時，須戴手套
• 必須用無離子水稀釋試劑溶液
• 孵育時，室溫進行
• 本公司提供系列蛋白染色試劑產品

 

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰

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