組織可溶性總蛋白質萃取試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

組織可溶性總蛋白質萃取試劑是一種旨在使用化學方法快速且充分裂解細胞，并在蛋白酶抑制混合劑的幫助下，通過超速離心，收集所有組織內可溶性蛋白質的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織（動物、人體）樣品。可直接用于后續蛋白電泳（SDS-PAGE）、西方雜交（Western blotting）、免疫沉淀（immunoprecipitation）、凝膠遷移率變動分析（gel mobility shift）、 DNA蛋白質相互作用分析（DNA-protein interaction）、酶活性分析（enzymatic activity analysis）、蛋白質相互作用分析（protein-protein interaction）、組織特異性表達識別（tissue specific expression identification）和質譜分析等。產品即到即用，性能穩定，操作便捷，萃取效果好。

技術背景

通過特殊裂解液和蛋白酶抑制混合劑可以防止裂解后細胞內各種活性蛋白成分遭到活化內源性蛋白酶的破壞，充分保留細胞內蛋白質的免疫和生物學活性。

產品內容

清理液（Reagent A）    100毫升

裂解液（Reagent B）     20毫升

活性液（Reagent C）    100微升

產品說明書 1份

保存方式

保存活性液（Reagent C）在-20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

（微型）臺式離心機：用于樣品操作

實驗步驟

實驗開始前，將試劑盒里的活性液（Reagent C）從－20℃的冰箱里取出，放進冰槽里凍融，然后移出1毫升裂解液（Reagent B）到1.5毫升離心管，加入5微升活性液（Reagent C），充分混勻，放進冰槽里，標記為裂解工作液。然后進行下列操作。

• 手術取出動物組織，并秤重以確定500毫克組織重量 
• （選擇步驟）放進預冷的15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入5毫升清理液（Reagent A）清洗1次
• 移入到一個液氮凍存管
• 即刻放進液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：切莫使組織凍融）
• 放進一個15毫升錐形離心管
• 加入置于冰槽里的1毫升含有裂解液（Reagent B）和活性液（Reagent C）的裂解工作液
• 強力渦旋震蕩30秒，充分混勻
• 放進冰槽里孵育30分鐘，期間每10分鐘強力渦旋震蕩30秒（注意：如需暫時停止，放進－70℃冰箱里儲存備用）
• 即刻放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為13000g
• 小心移取上清液到新的1.5毫升離心管
• 放進－70℃的冰箱里備用
• 或放進冰槽里，繼續各種后續（西方雜交、免疫沉淀等）操作

注意事項

• 本產品為20次操作
• 所有操作均須在無菌和4℃狀態下進行
• 裂解液（Reagent B）有利于特異性反應，最大限度地減低非特異性信號
• 建議一次操作的組織重量不少于100毫克，不超過5克
• 碾碎組織步驟：可以將液氮處理的組織放進15毫升錐形離心管，然后用針筒擠壓塞研磨
• 本產品按照500毫克組織重量配制。如果操作不同組織重量，可相應調整試劑用量，即100毫克組織，200微升裂解工作液；200毫克組織，500微升裂解工作液等
• 1克組織通常可獲得150至200毫克可溶性總蛋白
• 如果放在－70℃冰箱里儲存備用，避免反復凍融
• 本公司提供系列蛋白制備試劑產品
    

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無蛋白酶污染

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