石蠟切片組織總RNA分離試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

石蠟切片組織總RNA分離試劑是一種旨在使用標準化的化學方法，包括脫蠟處理、組織裂解、充分滅活組織中的RNA酶，以及有機溶劑有效萃取等完整步驟，從存檔中的石蠟包埋切片中獲得不含蛋白質和基因組DNA的純度最佳的總RNA的權威而經典的技術方法。其適用于固著在福爾馬林或非交聯固著劑的各種動物組織。產物可以直接用于Northern雜交、斑點雜交、mRNA純化、體外翻譯、RNA分解酶的保護分析、RT-PCR、構建cDNA文庫、SAGE技術等各種后續分子生物學實驗。產品即到即用，性能穩定，無核酶污染，操作極為簡便，產物純度高，重復性好，堪稱國際上同類產品最佳。

 

技術背景

 

動物組織通過福爾馬林或其它非交聯的固著劑固化后包埋在石蠟中長期保存歸檔。在需要時，可以進行組織免疫化學分析。通過一系列生物化學處理，隨時隨地便可獲得純化的核酸樣品。異硫氰酸胍（guanidine isothiocyanate）能充分有效地裂解組織細胞，并快速地使細胞內RNA酶滅活。同時在新鮮的β-巰基乙醇（β-Mercaptoethanol）的參與下，阻止RNA酶分子間二硫鍵的重新形成。在酸性環境下，酚氯仿的結合，使RNA與殘余蛋白和DNA徹底分離。

 

產品內容

 

脫蠟液A   120毫升

脫蠟液B      50毫升

脫蠟液C      50毫升

脫蠟液D    50毫升

脫蠟液E      50毫升

清理液（Reagent A）        20毫升

裂解液（Reagent B）    20毫升

萃取液（Reagent C）         10毫升

沉淀液（Reagent D）         10毫升

凈化液（Reagent E）         20毫升

保存液（Reagent F）      1毫升

產品說明書     1份

 

保存方式

 

保存萃取液（Reagent C）在－20℃冰箱里；清理液（Reagent A）、裂解液（Reagent B）、沉淀液（Reagent F）凈化液（Reagent E）、保存液（Reagent F）保存在4℃冰箱里；其余的保存在室溫下。有效保證6月

 

 

 

用戶自備

 

小型染色缸：用于石蠟切片的去石蠟

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

渦旋震蕩儀：用于樣品混勻

微型臺式離心機：用于樣品操作

 

實驗步驟

 

• 脫蠟處理

 

• 選擇10片大小為1 X 1厘米、厚為6微米的石蠟切片
• 按下表依次放進小型染色缸里室溫下孵育

染色缸	孵育時間
脫蠟液A	15分鐘
脫蠟液A	15分鐘
脫蠟液A	15分鐘
脫蠟液B	3分鐘
脫蠟液C	3分鐘
脫蠟液D	3分鐘
脫蠟液E	3分鐘

二、樣品脫蠟處理

1． 用刀片刮下5張組織切片

2． 放進1.5毫升離心管

3． 加入1毫升脫蠟液A到離心管

4． 渦旋震蕩15秒

5． 在室溫下靜置10分鐘

6． 放進微型臺式離心機離心2分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

7． 小心抽掉上清液

三、組織裂解處理

• 加入1毫升清理液（Reagent A），混勻
• 放進微型臺式離心機離心2分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升裂解液（Reagent B）
• 用移液管上下抽吸10次，充分混勻
• 強力渦旋震蕩30秒
• 置于室溫下（25℃）孵育5分鐘
• 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心移取500微升上清液到新的1.5毫升離心管

 

四、核酸萃取處理

 

• 加入500微升萃取液（Reagent C）
• 強力渦旋震蕩30秒
• 置于冰槽里孵育15分鐘
• 放進4℃臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心移取500微升上層液相溶液到新的預冷的1.5毫升離心管，留下（丟棄）25微升相位交界面的溶液
• 加入500微升沉淀液（Reagent D），混勻
• 置于-20℃冰箱里，孵育15分鐘
• 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升凈化液（Reagent E）
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去上清液
• 空氣中晾干
• 加入50微升保存液（Reagent F）
• 放進-70℃冰箱里儲存備用

 

注意事項

 

• 本產品為20次操作 
• 操作時須戴手套，以防核酶污染
• 建議使用濾芯槍頭，并格外小心，防止降解RNA
• 建議所有的操作用品屬于RNA專用
• RNA質量取決于石蠟切片里組織保存的質量
• 通常5至10張切片組織可以提取納克至微克級總RNA量
• 總RNA濃度測定（納克/微升）=OD260 X 1000 X 4 （1:100稀釋）；如果稀釋倍數1:200，則系數為8； 稀釋倍數1:400，則系數為16
• 純化的RNA保存在-70℃冰箱里，避免反復凍融
• 本公司提供系列RNA產品

 

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定萃取產量和純化程度高
• 本產品經鑒定適宜于固著劑處理的石蠟切片

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