動物細胞DNA分離試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

動物細胞DNA分離試劑是一種旨在直接從各種動物細胞中（包括人體）分離出基因組DNA，有效地去除細胞中存在的酶類或核內(nèi)蛋白成分的權威而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其應用于即時PCR、RLPF分析、測序、雜交、突變分析、遺傳鑒定、性別鑒定、司法鑒定、克隆等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作簡單，純度產(chǎn)量高，重復性好。

技術背景

細胞中含有許多核酸酶（RNase 和 DNase）以及其它蛋白成分，通過蛋白酶K，一種具有高比活性的非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關的絲氨酸蛋白酶，充分降解組織中蛋白質(zhì)特別是核酶，以阻止DNA產(chǎn)物的降解以及確保核內(nèi)DNA的充分釋放，獲得高質(zhì)量的DNA產(chǎn)物。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）       20毫升

裂解液（Reagent B）  10毫升

酶解液（Reagent C）       1毫升

萃取液（Reagent D）          10毫升

濃縮液（Reagent E）   4毫升

沉淀液（Reagent F）          20毫升

凈化液（Reagent G）       20毫升

保存液（Reagent H）     1毫升

產(chǎn)品說明書      1份

保存方式

保存酶解液（Reagent C）和萃取液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

HANK平衡鹽緩沖溶液（12028）或PBS緩沖溶液（12033）：用于清理細胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于細胞脫離

完全細胞培養(yǎng)液（12052）：用于細胞處理所需的培養(yǎng)基

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

2毫升離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器

臺式離心機（例如EPPENDORF5810）：用于樣品操作

微型臺式離心機（例如EPPENDORF5415）：用于樣品操作

渦旋震蕩儀：用于混勻反應物

恒溫水槽：用于孵育反應物

實驗步驟

• 準備好75cm²細胞培養(yǎng)瓶或100mm細胞培養(yǎng)皿的待測培養(yǎng)細胞（1至5 X 10⁶細胞）
• 加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到每個細胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面
• 小心抽去清洗液
• 加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個細胞生長表面
• 置入37℃培養(yǎng)箱孵育3分種
• 輕輕手擊震動培養(yǎng)瓶，使細胞脫落
• 加入10毫升用戶自備的完全細胞培養(yǎng)液
• 移入到一個15毫升錐形離心管
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為200g
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升清理液（Reagent A），混勻細胞
• 移入到1.5毫升離心管（注意：懸浮細胞從這一步驟開始）
• 放進4℃微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入500微升裂解液（Reagent B），充分混勻
• 強力渦旋震蕩30秒
• 置于冰槽里孵育30分鐘
• 加入50微升酶解液（Reagent C），混勻（注意：使用前，先搖勻酶解液（Reagent C））
• 放進58℃恒溫水槽孵育16小時
• 置于冰槽里孵育5分鐘
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為3000g（或6000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移出上清液到1.5毫升離心管
• 加入500微升萃取液（Reagent D） 
• 渦旋震蕩30秒
• 放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移出500微升上層液相溶液到新的新的2毫升離心管
• 加入200微升濃縮液（Reagent E）
• 加入1毫升沉淀液（Reagent F）
• 上下傾倒混勻

30． 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（例如eppendorf5415D，13000RPM）

• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升凈化液（Reagent G）
• 放進微型臺式離心機離心3分鐘，速度為16000g（例如eppendorf5415D，13000RPM）
• 小心抽去上清液
• 空氣中晾干
• 加入50微升保存液（Reagent H）
• 放進4℃冰箱里過夜備用或即刻進行后續(xù)操作

注意事項

• 本產(chǎn)品為20次（5 X 10⁶細胞樣品）或4次（5 X 10⁷細胞樣品）操作
• 其它實際操作的細胞量與試劑使用量按比例調(diào)整
• 操作時須戴手套
• 酶解液（Reagent C）可以放進37℃恒溫水槽少許時間，使其凍融
• 通常5 X 10⁶細胞可獲得300微克DNA
• 本公司提供系列基因組DNA萃取試劑

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純度產(chǎn)量高

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