冰凍切片DNA分離試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

冰凍切片DNA分離試劑是一種旨在使用無(wú)熱性酶消解、鹽析法等完整步驟，從存檔中的冰凍切片中溶解和分離DNA，使其適合PCR擴(kuò)增的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種動(dòng)物組織冰凍切片。用于后續(xù)的雜交、克隆、酶切、PCR分析等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，萃取產(chǎn)量和純化程度高。

技術(shù)背景

動(dòng)物組織通過(guò)OCT包埋后長(zhǎng)期保存歸檔。在需要時(shí)，可以進(jìn)行組織免疫化學(xué)分析。通過(guò)一系列生物化學(xué)處理，隨時(shí)隨地便可獲得純化的DNA樣品。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）      100毫升

酶解液（Reagent B）    40毫升

萃取液（Reagent C）  40毫升

濃縮液（Reagent D）    10毫升

沉淀液（Reagent E） 100毫升

凈化液（Reagent F） 100毫升

緩沖液（Reagent G）      3毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)     1份

保存方式

保存酶解液（Reagent B）和萃取液（Reagent C）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

渦旋震蕩儀：用于樣品混勻

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品離心

恒溫水槽或干式恒溫儀：用于樣品恒溫孵育

實(shí)驗(yàn)步驟

一、樣品處理

1． 用刀片刮下大小為1 X 1厘米、厚為6微米的冰凍切片上的組織樣品

2． 放進(jìn)1.5毫升離心管

• 加入1毫升清理液（Reagent A）到1.5毫升離心管
• 渦旋震蕩15秒
• 在室溫下靜置10分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心2分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液

二、蛋白消解處理

• 放進(jìn)58℃恒溫水槽或干式恒溫儀里孵育30分鐘
• 加入400微升酶解液（Reagent B）
• 充分混勻后，放進(jìn)58℃恒溫水槽或干式恒溫儀里繼續(xù)孵育16小時(shí)
• 放進(jìn)PCR級(jí)的沸點(diǎn)水杯里，煮沸10分鐘
• 在室溫下靜置至少15分鐘

三、核酸萃取處理

• 加入400微升萃取液（Reagent C）
• 渦旋震蕩儀上強(qiáng)烈震蕩30秒
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心4分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移出上層液相溶液到新的1.5毫升離心管，留下25微升相位交界面的溶液丟棄

• 核酸沉淀處理

• 加入100微升濃縮液（Reagent D）到含有上層液相溶液的離心管
• 加入800微升沉淀液（Reagent E）
• 在渦旋震蕩儀上強(qiáng)力震蕩30秒，充分混勻
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升清理液（Reagent F）
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 空氣中晾干沉淀顆粒群
• 加入30微升緩沖液（Reagent G） 
• 放進(jìn)－20℃冰箱長(zhǎng)期保存或移出2微升進(jìn)行10微升PCR反應(yīng)

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為100次操作
• 操作時(shí)須戴手套，以防核酶污染 
• 本公司提供系列核酸萃取試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定萃取產(chǎn)量和純化程度高

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