細胞總RNA純化試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

細胞總RNA純化試劑是一種旨在通過化學方法，快速裂解細胞，充分滅活RNA酶，以及有機溶劑有效萃取的技術處理，以獲得不含蛋白質和基因組DNA的純度最佳的總RNA的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種培養細胞樣品（人體、動物、植物等）的總RNA提取。產物可以直接用于Northern雜交、斑點雜交、mRNA純化、體外翻譯、RNA分解酶的保護分析、RT-PCR、構建cDNA文庫、SAGE技術等各種后續分子生物學實驗。產品即到即用，性能穩定，無核酶污染，操作極為簡便，產物純度高，重復性好，堪稱國際上同類產品最佳。

技術背景

異硫氰酸胍（guanidine isothiocyanate）能充分有效地裂解組織細胞，并快速地使細胞內RNA酶滅活。同時在新鮮的β-巰基乙醇（β-Mercaptoethanol）的參與下，阻止RNA酶分子間二硫鍵的重新形成。在酸性環境下，酚氯仿的結合，使RNA與殘余蛋白和DNA徹底分離。

產品內容

清理液（Reagent A）      200毫升

裂解液（Reagent B）  20毫升

萃取液（Reagent C）       20毫升

沉淀液（Reagent D）       10毫升

凈化液（Reagent E）       20毫升

保存液（Reagent F）   1毫升

產品說明書   1份

保存方式

保存萃取液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

臺式離心機：用于沉淀核酸

微型臺式離心機：用于核酸分層

渦旋震蕩儀：用于混勻

實驗步驟

• 準備好75cm²細胞培養瓶的細胞（1 X 10⁷細胞）
• 小心抽去細胞培養液
• 加入10毫升預冷的清理液（Reagent A）
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 加入1毫升裂解液（Reagent B），鋪滿整個細胞生長表面
• 用細胞刮脫棒刮下細胞
• 用移液管上下抽吸10次
• 轉移到15毫升錐形離心管
• 置于室溫下（25℃）孵育5分鐘
• 加入1毫升萃取液（Reagent C）
• 強力渦旋震蕩30秒
• 置于冰槽里孵育15分鐘
• 放進4℃臺式離心機離心15分鐘，速度為10000g
• 小心移取1毫升上層液相溶液到新的預冷的1.5毫升離心管，留下（丟棄）25微升相位交界面的溶液
• 加入500微升沉淀液（Reagent D），混勻
• 置于－20℃冰箱里，孵育15分鐘
• 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升凈化液（Reagent E）
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 空氣中晾干
• 加入50微升保存液（Reagent F）
• 放進－70℃冰箱里儲存備用

注意事項

• 本產品為20次操作
• 如果樣品量減半，則試劑用量相應減半，以此類推
• 整個操作須在4℃狀態下進行
• 整個操作須帶手套
• 建議使用濾芯槍頭，并格外小心，防止降解RNA
• 建議所有的操作用品屬于RNA專用
• 通常1 X 10⁷細胞中可以提取50至100微克總RNA量
• 總RNA濃度測定（納克/微升）=OD260 X 1000 X 4 (1:100稀釋)；如果稀釋倍數1:200，則系數為8； 稀釋倍數1:400，則系數為16
• 純化的RNA保存在－70℃冰箱里，避免反復凍融
• 本公司提供系列RNA產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無核酶成分
• 本產品經鑒定純化程度高

上海一基實業有限公司多年專供：ELISA試劑盒，PCR恒溫熒光測試盒、朗道校準品、校準質控品、標準品|對照品、抗體|抗原、生物試劑、動物血清、人類CDNA、基因組DNA、MicroRNA產品、總RNA產品、人原代細胞裂解液、生物試劑、高端試劑等系列產品。如需產品詳細說明等物理性質信息請聯系客服為您查詢！質量保證，價格優惠，是國內生物試劑權威的供應商之一，專業經銷生物科學領域的品牌試劑：Sigma試劑、ASROS試劑、AIFA試劑、alding試劑、Fisher試劑、日本MBL試劑、美國劍橋CIL氘代試劑、ATCC菌株等品牌產品。擁有齊全的生產和檢測設備，實施嚴格的管理制度和完善的質量保證體系，為廣大客戶提供全面的技術支持和完善的售后服務。歡迎來電咨詢!