土壤DNA分離＋高質(zhì)純化試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

主要用途

土壤DNA分離＋高質(zhì)純化試劑是一種旨在直接從各種土壤（森林土壤、沼澤地、種植園、洞穴沉積土等）中提取DNA，有效地去除各種污染物（蛋白、核酶、酸類等）和抑制劑（PCR多聚酶抑制劑等）。在標(biāo)準(zhǔn)分離法的基礎(chǔ)上，由各種土壤中分離獲得的DNA，進(jìn)行二度親和純化，最大限度地去除復(fù)雜又難以去除的蛋白、金屬成分、雜質(zhì)等非核酸類物質(zhì)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其應(yīng)用于即時(shí)PCR、RLPF分析、測(cè)序、雜交、野外生物種類基因分析等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)單，純度產(chǎn)量高，重復(fù)性好。

技術(shù)背景

土壤中含有許多污染成分，降解DNA和抑制PCR反應(yīng)。通過冷凍處理、化學(xué)緩沖、孵育溫度、大劑量特級(jí)酶、CTAB（cetyltrimethyl-ammonium bromide； 十六烷基三甲基溴化銨）純化、異硫氰酸胍（GuSCN）處理、特別萃取等技術(shù)方法有效地去除各種干擾因子。針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)處理無(wú)法有效地去除頑固干擾因子的情況下，運(yùn)用特殊親和技術(shù)，達(dá)到高度純化的效果。 

產(chǎn)品內(nèi)容

緩沖液（Reagent A）      10毫升

分離液（Reagent B）    8毫升

酶解液（Reagent C） 2.5毫升

萃取液（Reagent D）         20毫升

濃縮液（Reagent E）  6毫升

沉淀液（Reagent F）         10毫升

清理液（Reagent G）      20毫升

保存液（Reagent H）    1毫升

親和液（Reagent I）     500微升

產(chǎn)品說(shuō)明書     1份

保存方式

保存酶解液（Reagent C）和萃取液（Reagent D）在－20℃冰箱里；若暫不使用，其余的保存在4℃冰箱里；若日常使用，其余的保存在室溫下；有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

2毫升離心管：用于DNA純化操作的容器

1.5毫升離心管：用于保存DNA

臺(tái)式離心機(jī)（例如EPPENDORF 5810）：用于沉淀雜質(zhì)

微型臺(tái)式離心機(jī)（例如EPPENDORF 5415）：用于沉淀核酸

渦旋震蕩儀：用于混勻反應(yīng)物

恒溫水槽：用于孵育反應(yīng)物

實(shí)驗(yàn)步驟

提取實(shí)驗(yàn)開始前，將酶解液（Reagent C）和萃取液（Reagent D）從－20℃冰箱里取出，放入冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作：

• 秤取200毫克的土壤樣品放進(jìn)15毫升錐形離心管
• 放入－70℃冰箱里過夜
• 加入500微升緩沖液（Reagent A）到15毫升錐形離心管
• 室溫下靜置15分鐘
• 強(qiáng)力渦旋震蕩，直至固態(tài)物質(zhì)充分混勻（注意：此步驟重要）
• 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3000g
• （選擇步驟）小心移出上清液到15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心30分鐘，速度為3500g
• 小心移出上清液（500微升）到新的2毫升離心管
• 加入375微升分離液（Reagent B）（注意：使用前，先搖勻分離液（Reagent B））
• 加入125微升酶解液（Reagent C）（注意：使用前，先混勻酶解液（Reagent C））
• 渦旋震蕩15秒
• 放進(jìn)60℃恒溫水槽孵育30分鐘（注意：可以增加孵育時(shí)間至2小時(shí)，增加DNA產(chǎn)量）
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心20秒，速度為400g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• （選擇步驟）放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）（注意：強(qiáng)化去除有色雜質(zhì)：白色、黃色、棕色等）
• （選擇步驟）小心移出上清液到新的2毫升離心管（注意：留下100微升液體）
• 加入1毫升萃取液（Reagent D）（注意：使用前，先搖勻萃取液（Reagent D））
• 渦旋震蕩30秒
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移出900微升上層液相溶液到新的1.5毫升離心管（注意：不要觸碰相位交界面）
• 加入250微升濃縮液（Reagent E）
• 加入500微升沉淀液（Reagent F）
• 上下翻轉(zhuǎn)10至15次，混勻
• 靜置5分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升清理液（Reagent G）
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 空氣中晾干
• 加入25微升保存液（Reagent H）
• 溶解后，加入25微升親和液（Reagent I）（注意：使用前，先搖勻沉淀的親和液（Reagent I））
• 用手輕彈，充分混勻
• 放進(jìn)56℃恒溫水槽孵育30分鐘，期間用手混勻一次
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移出40微升上清液到新的1.5毫升離心管
• 移出適量DNA溶液進(jìn)行后續(xù)PCR反應(yīng)或保存在－20℃冰箱里

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為20次（100至300毫克樣品）操作
• 建議土壤樣品收集后，即刻放進(jìn)－70℃冰箱里儲(chǔ)存，避免反復(fù)凍融
• 收集樣品時(shí)，盡量去除明顯的污染
• 土壤固態(tài)物質(zhì)充分混勻后，可以放進(jìn)－70℃冰箱里長(zhǎng)期儲(chǔ)存，但建議只需凍融一次
• 土壤樣品量為100至300毫克；如果用戶需要從大量土壤中提取，可以按比例相應(yīng)增加操作量即可
• 通常200毫克樣品可以提取10微克左右DNA量；但不同樣品，存在很大差異（5至100微克）
• 分離液（Reagent B）易形成晶狀體，使用前可37℃溫育融化
• 本公司提供系列土壤核酸制備產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純度產(chǎn)量高

上海一基實(shí)業(yè)有限公司多年專供：ELISA試劑盒，PCR恒溫?zé)晒鉁y(cè)試盒、朗道校準(zhǔn)品、校準(zhǔn)質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品、抗體|抗原、生物試劑、動(dòng)物血清、人類CDNA、基因組DNA、MicroRNA產(chǎn)品、總RNA產(chǎn)品、人原代細(xì)胞裂解液、生物試劑、高端試劑等系列產(chǎn)品。如需產(chǎn)品詳細(xì)說(shuō)明等物理性質(zhì)信息請(qǐng)聯(lián)系客服為您查詢！質(zhì)量保證，價(jià)格優(yōu)惠，是國(guó)內(nèi)生物試劑權(quán)威的供應(yīng)商之一，專業(yè)經(jīng)銷生物科學(xué)領(lǐng)域的品牌試劑：Sigma試劑、ASROS試劑、AIFA試劑、alding試劑、Fisher試劑、日本MBL試劑、美國(guó)劍橋CIL氘代試劑、ATCC菌株等品牌產(chǎn)品。擁有齊全的生產(chǎn)和檢測(cè)設(shè)備，實(shí)施嚴(yán)格的管理制度和完善的質(zhì)量保證體系，為廣大客戶提供全面的技術(shù)支持和完善的售后服務(wù)。歡迎來(lái)電咨詢!