SDS蛋白酶K－DNA萃取試劑盒產品說明書

主要用途

 SDS蛋白酶K－DNA萃取試劑是一種旨在通過蛋白酶K在十二烷基硫酸鈉（SDS）的穩定和促進下，降解組織或細胞中蛋白質特別是核酶，以達到萃取高質量的DNA的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適用于動物組織、細胞、微生物和植物中的核酸成分。產品即到即用，性能穩定，萃取程度高。

技術背景

蛋白酶K是一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關的絲氨酸蛋白酶，具有很高的比活性。EDTA等鰲合劑或SDS等去垢劑不能使蛋白酶K失活，反而增強和穩定酶活性。在組織或細胞核酸分離時，使核酸酶（RNase和DNase）以及反應中的其他酶類失活。

產品內容

緩沖液（Reagent A）      50毫升

酶解液（Reagent B） 6.5毫升

萃取液（Reagent C）      60毫升

濃縮液（Reagent D） 20毫升

沉淀液（Reagent E）     100毫升

凈化液（Reagent F）     100毫升

保存液（Reagent G） 20毫升

產品說明書  1份

保存方式

保存酶解液（Reagent B）和萃取液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

臺式離心機：用于沉淀核酸

渦旋震蕩儀：用于混勻

實驗步驟

• 將150毫克組織樣品或10⁸細胞放進15毫升錐形離心管
• 加入5毫升 緩沖液（Reagent A），輕輕搗碎組織或離心后的細胞沉淀顆粒
• 加入500微升酶解液（Reagent B）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進58℃恒溫水槽孵育48小時
• 渦旋震蕩1分鐘
• 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為2400g
• 加入150微升酶解液（Reagent B）
• 放進58℃恒溫水槽孵育過夜
• 渦旋震蕩15秒
• 加入6毫升萃取液（Reagent C）
• 渦旋震蕩1分鐘
• 放進臺式離心機離心10分鐘，速度為1200g
• 移出上層液相（保留少量相位交界面的溶液）到新的15毫升錐形離心管
• 加入2毫升濃縮液（Reagent D）
• 再加入7毫升沉淀液（Reagent E），封蓋
• 渦旋震蕩1分鐘
• 放進臺式離心機離心30分鐘，速度為1200g
• 小心抽掉上清液
• 加入10毫升凈化液（Reagent F）
• 放進臺式離心機離心2分鐘，速度為1200g
• 小心抽掉上清液
• 空氣中晾干沉淀顆粒
• 加入2毫升保存液（Reagent G）
• 溶解后即可使用或保存在－20℃冰箱里

注意事項

• 本產品為10次（100至300毫克組織或10⁸細胞）或50次（20至50毫克組織或10⁷細胞）操作
• 操作時，須戴手套
• 如果組織樣品狀態欠佳，建議使用萃取液（Reagent C）和凈化液（Reagent F）兩次，確保核酸的純度
• 100至300毫克組織或10⁸細胞通常可以提取約300微克DNA
• 本產品使用飽和特級蛋白酶處理組織樣品
• 本公司提供系列DNA萃取試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定無核酶污染
• 本產品經鑒定純化程度高

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