酚氯仿法（PC8）DNA萃取試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

酚氯仿法（PC8）DNA萃取試劑是一種旨在使蛋白質變性（denaturation），同時徹底清除蛋白質（deproteination）及其它成分來達到純化DNA的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于單純DNA和RNA操作或PCR產物的萃取以及SAGE技術等。產品即到即用，性能穩定，嚴格無核酶污染，萃取純度高。

技術背景

酚或酚氯仿混合物是提純核酸成分的重要步驟。通過這些化學處理，使混雜在核酸里的蛋白質二維結構受到破壞，然后經過相位分離將非核酸成分除去，為下一步乙醇濃縮沉淀打好基礎。酚氯仿試劑較之傳統的配方更優化。

產品內容

緩沖液（Reagent A） 20毫升

萃取液（Reagent B） 30毫升

濃縮液（Reagent C）  5毫升

沉淀液（Reagent D） 50毫升

助沉液（Reagent E） 50微升

清理液（Reagent F）      50毫升

產品說明書         1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，避免光照，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

渦旋震蕩儀：用于樣品混勻

微型臺式離心機：用于樣品分離

實驗步驟

• 準備1個新的1.5毫升離心管
• 加入300微升樣品或加入適量的緩沖液（Reagent A）達到樣品總容量為300微升
• 加入300微升萃取液（Reagent B）到1.5毫升離心管
• 按上蓋子后，在渦旋震蕩儀上強烈震蕩30秒
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 移出上層液相溶液到新的1.5毫升離心管，留下25微升相位交界面的溶液
• （選擇步驟）如果樣品本身污染嚴重（例如含有過多組織蛋白等），重復實驗步驟3至6
• 加入100微升濃縮液（Reagent C）到離心管
• 加入1毫升沉淀液（Reagent D）
• 加入1微升助沉液（Reagent E）
• 在渦旋震蕩儀上震蕩15秒，充分混勻
• （選擇步驟）如果DNA樣品為納克級或片斷為20個堿基，選擇置于－70℃冰箱孵育2小時或－20℃冰箱孵育過夜
• 放進微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升清理液（Reagent F）
• 放進微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽去上清液
• 空氣中晾干
• 加入100微升緩沖液（Reagent A）
• 放進－20℃冰箱長期保存
• 進行后續乙醇沉淀

注意事項

• 本產品為50次操作
• 操作時須戴手套
• 萃取液（Reagent B）具有腐蝕性，使用時小心謹慎
• 如果樣品量增加，則相應增加試劑用量：樣品容量和試劑用量等量使用；最低不得低于200微升
• 萃取液（Reagent B）和樣品要充分混勻
• 移出操作時，避免接觸相位界面，以防污染
• 本公司提供系列核酸純化試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定萃取純度高
• 本產品經鑒定無核酶污染

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