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M13噬菌體的原理、技術流程及應用領域

瀏覽次數:41 發布日期:2025-5-8  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
噬菌體(Bacteriophage,簡稱“噬菌體”或“噬菌病毒”)是一類專門感染細菌的病毒。它們是由蛋白質外殼和內部的遺傳物質(DNA或RNA)組成。噬菌體在自然界中廣泛存在,能夠在細菌的表面附著并將其遺傳物質注入細菌細胞內,從而利用細菌的生物機制進行復制。

常見的噬菌體種類


M13噬菌體的結構示意圖

噬菌展示技術介紹

歷史背景
該技術由George Smith于1985年首創,因其在定向分子進化中的貢獻,Smith與Gregory Winter共同獲得2018年諾貝爾化學獎。M13因其溫和特性(不裂解宿主)成為最常用的展示載體之一。

基本原理
M13噬菌體是一種感染大腸桿菌的絲狀噬菌體,其基因組為單鏈DNA。展示技術的核心是通過基因工程將外源蛋白基因與噬菌體衣殼蛋白(如pIII或pVIII)基因融合,使外源蛋白在噬菌體表面表達。
pIII蛋白:位于噬菌體末端,通常展示單拷貝的大分子蛋白(如抗體片段)。
pVIII蛋白:構成噬菌體主要衣殼,適合展示多拷貝的小肽(如10-20個氨基酸)。

技術流程
1.基因克。簩⒛繕说鞍谆螂牡木幋a基因克隆到M13噬菌體的基因組中,通常是插入到編碼噬菌體外殼蛋白的基因中。
2.噬菌體文庫構建:轉化改造后的M13噬菌體到大腸桿菌中,感染細菌后,噬菌體會在細菌內復制并合成外殼蛋白,同時將目標蛋白或肽展示在噬菌體表面。
3.親和篩選(Panning):將噬菌體與固定化的靶分子(如抗原)孵育。洗去未結合的噬菌體,保留特異性結合的噬菌體。
4.擴增與富集:回收結合的噬菌體,感染大腸桿菌擴增,重復篩選3-4輪以提高結合力。
5.鑒定:通過測序或功能實驗分析篩選出的噬菌體攜帶的外源基因。


The general process of biopanning

核心優勢
直接基因關聯:噬菌體攜帶外源蛋白的編碼基因,便于后續克隆。
高通量篩選:可快速篩選數百萬至數十億個分子。
無需蛋白純化:展示的蛋白直接用于結合實驗。

應用領域
抗體篩選:M13噬菌體展示技術最廣泛的應用之一就是單克隆抗體的篩選。通過展示不同抗體片段(如重鏈或輕鏈的可變區),可以快速篩選出與特定抗原結合的抗體。這些抗體可以用于疾病診斷、治療等領域。

疫苗開發:可以利用噬菌體展示技術展示病原體的表面抗原,通過篩選獲得與病原物質相互作用的抗原肽,這為疫苗的設計提供了線索。

藥物篩選:該技術還可用于小分子藥物的篩選,尤其是在尋找靶標分子或蛋白質相互作用方面。例如,通過展示小肽,可以篩選出具有特定生物活性的分子。

蛋白質-蛋白質相互作用研究:利用噬菌體展示技術,可以探究不同蛋白質之間的相互作用。例如,通過展示一個蛋白的特定片段,尋找能夠結合該片段的其他蛋白質。

新型酶的開發:通過展示酶活性位點的特定肽,可以篩選出具有所需酶活性的突變體或全新酶。

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部分數據展示
M13 phage Recombinant Rabbit mAb (Biotin Conjugate) (S-1403-13) (貨號:S0B1686)

Indirect ELISA binding analysis of M13 phage Recombinant Rabbit mAb (Biotin Conjugate) (S-1403-13)
Coating: M13 phage, 1*10E7 pfu/ml
Primary antibody: M13 phage (Biotin Conjugate) (S-1403-13), from 1μg/ml, 3-fold diluent, 7 points

M13 OneStep ELISA Kit(貨號:S0C3033)


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產品信息

 
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發布者:杭州斯達特生物科技有限公司
聯系電話:13774214275
E-mail:zhouzz@starter-bio.com

標簽: 抗體 噬菌體
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