同型對(duì)照抗體的選擇和使用方法及PBS替代的可行性
什么是同型對(duì)照抗體？一定要用嗎？用 PBS 替代是否可行？同型對(duì)照抗體該怎么選？
Tips：
01
什么是同型對(duì)照抗體？
同型對(duì)照抗體 (Isotype control antibody) 通常用于在體外和體內(nèi)準(zhǔn)確檢測(cè)抗體藥物作用和功效，評(píng)估非特異性結(jié)合或背景信號(hào)。它們與研究抗體 (實(shí)驗(yàn)抗體) 有相同的類(lèi)別和亞類(lèi)，但是它們與目標(biāo)靶點(diǎn)無(wú)特異性結(jié)合。
02
為何使用同型對(duì)照抗體？
在進(jìn)行體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)和體外免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)時(shí)，同型對(duì)照抗體的作用至關(guān)重要：
03
PBS 是否可作同型對(duì)照抗體的“平替”？
同型對(duì)照抗體作為體內(nèi)療效的重要工具，為準(zhǔn)確評(píng)價(jià)抗體藥物效應(yīng)提供適當(dāng)?shù)年幮詫?duì)照。與同型對(duì)照進(jìn)行比較，可以避免對(duì)抗體功效產(chǎn)生高估或低估，對(duì)于下游結(jié)果的免疫分析和數(shù)據(jù)分析非常重要。
PBS 作為對(duì)照（如 PBS）可能會(huì)導(dǎo)致數(shù)據(jù)的假陽(yáng)性。而高質(zhì)量的同型對(duì)照抗體可以準(zhǔn)確區(qū)分精準(zhǔn)藥物開(kāi)發(fā)分析的特異性與背景。
04
同型對(duì)照抗體選擇原則？
1. 種屬來(lái)源相同 – Mouse, Rat, Human；
2. 亞型相同 – IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3；
3. 亞鏈相同 – kappa, lambda;
4. 濃度劑量相同 – 對(duì)照抗體的使用濃度或劑量應(yīng)與實(shí)驗(yàn)抗體相同或相似；
5. 抗體質(zhì)量 – 選擇高純度、低內(nèi)毒素的同型對(duì)照抗體。
IgG 亞類(lèi)在小鼠模型和人類(lèi)中差異最大。人 IgG 同種型由四個(gè)亞類(lèi) (IgG1、IgG2、IgG3 和 IgG4) 組成，每個(gè)亞類(lèi)包含不同的重鏈。在小鼠中，IgG 亞型分為五個(gè)亞類(lèi) (IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c 和 IgG3)。在大鼠中，有四個(gè)亞類(lèi) (IgG1、 IgG2a、IgG2b、IgG2c)。
詢(xún)價(jià)與訂購(gòu)：
MCE 為廣大客戶(hù)提供高質(zhì)量，高純度的同型對(duì)照抗體，經(jīng) SDS-PAGE，SEC-HPLC 驗(yàn)證純度大于 95%，內(nèi)毒素小于 1 EU/mg，可用于體內(nèi)研究。
參考文獻(xiàn)：
[1] Schmid AS, et al. Advances in antibody engineering for rheumatic diseases. Nat Rev Rheumatol. 2019 Apr;15(4):197-207.
[2] Hammerbeck, C. et al. Primary and Secondary Antibodies and Flow Cytometry Controls. In: Flow Cytometry Basics for the Non-Expert. Techniques in Life Science and Biomedicine for the Non-Expert. Springer, Cham. 2018.
Tips：
- 對(duì)照抗體包括陽(yáng)性對(duì)照抗體和陰性對(duì)照抗體。
- 陰性對(duì)照抗體一般為同型對(duì)照抗體。
- 陽(yáng)性對(duì)照抗體一般為已進(jìn)入臨床研究或者臨床已經(jīng)獲批被證明有效的抗體。
01
什么是同型對(duì)照抗體？
同型對(duì)照抗體 (Isotype control antibody) 通常用于在體外和體內(nèi)準(zhǔn)確檢測(cè)抗體藥物作用和功效，評(píng)估非特異性結(jié)合或背景信號(hào)。它們與研究抗體 (實(shí)驗(yàn)抗體) 有相同的類(lèi)別和亞類(lèi)，但是它們與目標(biāo)靶點(diǎn)無(wú)特異性結(jié)合。
圖 1. 用作陰性對(duì)照的同型對(duì)照抗體。
- MCE 同型對(duì)照抗體專(zhuān)門(mén)為動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究定制，已經(jīng)在體內(nèi)藥效研究中成功通過(guò)驗(yàn)證。
- MCE 同型對(duì)照抗體是以 Hen egg lysozyme / HA protein of H7N9 / trinitrophenol 為抗原在 CHO 細(xì)胞中表達(dá)的重組抗體。抗原蛋白在人與小鼠中均不存在，從而避免了發(fā)生交叉反應(yīng)。
- MCE 同型對(duì)照抗體在低內(nèi)毒素條件下生產(chǎn)，并通過(guò)了嚴(yán)格的質(zhì)量控制。每個(gè)同型對(duì)照抗體都能適用于多方面的應(yīng)用，如作為體內(nèi)陰性對(duì)照，流式抗體等。
02
為何使用同型對(duì)照抗體？
在進(jìn)行體內(nèi)藥效評(píng)價(jià)和體外免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)時(shí)，同型對(duì)照抗體的作用至關(guān)重要：
- 評(píng)估非特異性結(jié)合：由于抗體與靶細(xì)胞上的 Fc 受體結(jié)合，如 B 細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、NK 細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等，可能導(dǎo)致假陽(yáng)性[1]。因此，同型對(duì)照抗體可以幫助排除由待測(cè)抗體的 Fc 與 FcR 結(jié)合導(dǎo)致對(duì)療效分析可能產(chǎn)生的影響；
- 優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件：不清楚表達(dá)情況的時(shí)候，特別是確定某種抗原是否在細(xì)胞表達(dá)以及相應(yīng)表達(dá)含量時(shí)，一定要用同型對(duì)照來(lái)界定陰性；
- 確保結(jié)果的準(zhǔn)確性：它們是實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的保證。
圖 2. 抗體 Fc 介導(dǎo)的效應(yīng)器功能[1]。
03
PBS 是否可作同型對(duì)照抗體的“平替”？
同型對(duì)照抗體作為體內(nèi)療效的重要工具，為準(zhǔn)確評(píng)價(jià)抗體藥物效應(yīng)提供適當(dāng)?shù)年幮詫?duì)照。與同型對(duì)照進(jìn)行比較，可以避免對(duì)抗體功效產(chǎn)生高估或低估，對(duì)于下游結(jié)果的免疫分析和數(shù)據(jù)分析非常重要。
PBS 作為對(duì)照（如 PBS）可能會(huì)導(dǎo)致數(shù)據(jù)的假陽(yáng)性。而高質(zhì)量的同型對(duì)照抗體可以準(zhǔn)確區(qū)分精準(zhǔn)藥物開(kāi)發(fā)分析的特異性與背景。
04
同型對(duì)照抗體選擇原則？
1. 種屬來(lái)源相同 – Mouse, Rat, Human；
2. 亞型相同 – IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3；
3. 亞鏈相同 – kappa, lambda;
4. 濃度劑量相同 – 對(duì)照抗體的使用濃度或劑量應(yīng)與實(shí)驗(yàn)抗體相同或相似；
5. 抗體質(zhì)量 – 選擇高純度、低內(nèi)毒素的同型對(duì)照抗體。
IgG 亞類(lèi)在小鼠模型和人類(lèi)中差異最大。人 IgG 同種型由四個(gè)亞類(lèi) (IgG1、IgG2、IgG3 和 IgG4) 組成，每個(gè)亞類(lèi)包含不同的重鏈。在小鼠中，IgG 亞型分為五個(gè)亞類(lèi) (IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c 和 IgG3)。在大鼠中，有四個(gè)亞類(lèi) (IgG1、 IgG2a、IgG2b、IgG2c)。
圖 3. 流式細(xì)胞術(shù)以 Mouse IgG2a 作為陰性對(duì)照[2]。
使用抗原特異性抗體與同型對(duì)照抗 (a)，而用 KLH 蛋白免疫小鼠產(chǎn)生的同型對(duì)照抗體不結(jié)合 (b)。用抗原特異性鼠抗人 CD4 抗體對(duì)人 PBMC 染色時(shí)，可檢測(cè)到陽(yáng)性熒光信號(hào)，而用相應(yīng)的鼠 IgG2a 同型對(duì)照抗體則檢測(cè)不到陽(yáng)性信號(hào)。詢(xún)價(jià)與訂購(gòu)：
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參考文獻(xiàn)：
[1] Schmid AS, et al. Advances in antibody engineering for rheumatic diseases. Nat Rev Rheumatol. 2019 Apr;15(4):197-207.
[2] Hammerbeck, C. et al. Primary and Secondary Antibodies and Flow Cytometry Controls. In: Flow Cytometry Basics for the Non-Expert. Techniques in Life Science and Biomedicine for the Non-Expert. Springer, Cham. 2018.
標(biāo)簽：
#抗體#同型對(duì)照抗體#PBS
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