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PEAKS denovo從頭測序功能介紹--一種不依賴于數(shù)據(jù)庫的肽段鑒定方法

瀏覽次數(shù):2943 發(fā)布日期:2023-4-10  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
在串聯(lián)質(zhì)譜中,質(zhì)譜通過對肽鏈碎裂產(chǎn)生的碎片離子檢測,進而產(chǎn)生ms/ms譜。根據(jù)所采用的碎裂方法,可以產(chǎn)生不同的碎片離子類型。未知多肽的測序是在不需要序列數(shù)據(jù)庫的情況下,從質(zhì)譜中解析出氨基酸序列。這與另一種流行的肽段鑒定方法--“數(shù)據(jù)庫搜索”形成了鮮明對比,即在給定的數(shù)據(jù)庫中搜索與該譜圖正確匹配概率最大(或者錯配概率最。┑碾摹.(dāng)沒有可參考的序列數(shù)據(jù)庫時,多肽的從頭測序是唯一的選擇。

業(yè)界知名的PEAKS系列軟件的核心算法之一就有de novo,可以不依賴于數(shù)據(jù)庫高效地進行全自動的肽段序列預(yù)測。這使得PEAKS軟件成為鑒定未測序生物中新的肽和蛋白質(zhì)的首選方法。
PEAKS de novo功能特點

高通量、自動化的從頭測序
精確的算法,提供de novo結(jié)果可信度打分,確保氨基酸水平的精確度
與database search整合,深度挖掘蛋白質(zhì)組的未知信息
支持CID、HCD、ETD/ECD 、EThcD、EAD等多種碎裂模式



精確度
PEAKS使用了全面綜合的打分體系,來對于de novo的肽段序列結(jié)果的準(zhǔn)確性進行打分評估。PEAKS的獨特之處在于local confidence(LC score)評分--評估結(jié)果中肽段每個氨基酸分配的可能性。local confidence score將測序的準(zhǔn)確度聚焦到氨基酸水平。在圖中, TYEQLAEQNR 是通過了可靠性閾值的序列標(biāo)簽。


互補的碎片離子
碎片離子對的使用:de novo從頭測序使用由不同的碎裂方式(例如ETD/HCD)產(chǎn)生的成對的譜圖。每個互補的譜圖產(chǎn)生置信度de novo序列標(biāo)簽用來重構(gòu)一個肽序列,并對兩個譜圖進行優(yōu)化。
不同譜圖進行測序(優(yōu)化前)  


互補的譜圖進行測序(優(yōu)化后)


與Database Search整合
PEAKS的獨特之處在于能夠?qū)⒍嚯?em>de novo測序結(jié)果與數(shù)據(jù)庫搜索結(jié)果相結(jié)合。多肽de novo序列與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫條目比對,以提供關(guān)于PTM、突變、同源多肽和全新肽段的附加信息。



從多肽從頭測序到蛋白質(zhì)測序
蛋白質(zhì)的序列可以由多肽的de novo測序結(jié)果中獲得。擁有直接的譜圖碎片離子證據(jù)的可靠的de novo多肽序列標(biāo)簽,可以用來組裝為蛋白質(zhì)序列。PEAKS de novo應(yīng)用到蛋白質(zhì)測序的最佳實例就是在抗體測序方面的軟件PEAKS AB--該軟件可依據(jù)質(zhì)譜二級譜圖所提供的譜峰信息全自動對抗體進行蛋白水平de novo從頭測序及序列拼接的工作,高效自動化地代替人工拼接,從而獲得目標(biāo)抗體的全序列,為研發(fā)工作帶來更大的便利和更好的準(zhǔn)確性。
 
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發(fā)布者:百蓁生物科技(上海)有限公司
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