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多重熒光免疫染色技術的原理及實驗步驟(對話ChatGPT)

瀏覽次數:3323 發布日期:2023-2-16  來源:absin

最近的網絡好像被人工智能聊天系統——ChatGPT占領了,聽說它無所不知,還能幫寫文章,各大高校緊急禁用;還聽說未來很多人的工作都會被它取代,那小編作為技術支持豈不是很危險?等不了了,立刻發起挑戰!

 
咦!它還真知道點什么!回答得也還不錯誒。繼續試試!


 

錯了錯了,它犯了所有懂又不完全懂的人最容易犯的錯,跟免疫熒光(IF)混淆了,免疫熒光確實也能夠實現多個指標的共染色,但是因為需要共同孵育一抗,所以每個指標對應的一抗都不能是同種來源,并且熒光素是直接結合在二抗上,所以還要搭配對應的熒光二抗,目前市面上也就那么幾種一抗來源,所以直接局限了免疫熒光可以實現的多標數量,基本就是雙標頂多三標。算了,還是我來給它點小小的提示吧!


 

這回對了,多重熒光免疫組化的核心是TSA技術,又是熒光又是組化的,也難怪ChatGPT迷茫了,小編給各位老師展示幾個原理圖幫助理解吧~



 

其實ChatGPT還是有一點回答得不夠準確,活化的熒光染料不止結合到抗體周圍,它是跟蛋白殘基(酪氨酸、色氨酸、組氨酸、苯丙氨酸等芳香族氨基酸)共價結合(見下圖反應式),并不是蛋白與蛋白之間的結合,所以它也能夠“直搗黃龍”結合在抗原周圍,為什么強調這一點呢?其實跟我們后續的實驗操作是密切相關的。

TSA熒光染料與帶酪氨酸殘基的目標蛋白共價結合


又錯了又錯了,又串到免疫熒光去了!


 

好吧,糾正以后勉強還是回答出來了,多色實驗每次是只染一個指標的抗體,染完洗掉以后才會做下一個,而這個洗脫步驟為什么不會洗掉結合好的熒光素呢?就是因為原理說的染料和抗原是共價結合,而抗原抗體是蛋白質之間的結合,洗脫的步驟能夠破壞蛋白間作用力,卻不能破壞穩定的共價鍵,也因著每次染色切片上只有一種抗體,所以我們選擇一抗的時候就不用去搭配一抗種屬,理論上只要我們能找到不同的熒光染料,再有一臺能拍那么多熒光的儀器就能夠實現超多標,目前Absin能夠實現的染色天花板是9標10色。
 

那大概了解了這個技術以后,就是該怎么用的問題了~


 

回答得不錯!多色技術主要是能夠在一張片子上呈現更豐富的信息,只要是多指標相關的研究,這項技術都是很合適的~
 

綜合這次會話來說,人工智能也并沒有那么全能,不會就算了,還自信回復,豈不是容易誤導他人?所以各位老師有多色相關的技術問題還是來問Absin吧,ChatGPT數據庫僅截止到2021年,但Absin會一直學習一直成長,歡迎各位老師跟我們一起探討一起進步!

發布者:愛必信(上海)生物科技有限公司
聯系電話:021-38015121
E-mail:info@absin.cn

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