在樣本制備的過程中，往往會(huì)應(yīng)用一些試劑（如多聚甲醛、福爾馬林等）對(duì)新鮮組織進(jìn)行處理，這個(gè)過程可能導(dǎo)致抗原位點(diǎn)被封閉，為了避免影響后續(xù)免疫染色的效果，我們需要先對(duì)切片進(jìn)行抗原修復(fù)。對(duì)于石蠟切片來說，抗原修復(fù)是不可或缺的步驟，常用的方法有酶消化法和熱修復(fù)法。
 

作為最早的抗原修復(fù)方法，常用的消化酶有三：胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K。但酶的作用極易受溫度影響，如果消化不足，則無法充分暴露出抗原位點(diǎn)，過度的消化又會(huì)破壞組織結(jié)構(gòu)，影響最后陽性信號(hào)的判讀，因此在后續(xù)的發(fā)展中，酶消化法漸漸被熱修復(fù)技術(shù)所替代，但對(duì)于個(gè)別抗原，如免疫球蛋白、補(bǔ)體，以及在甲醛固定、石蠟包埋的腎活檢中，酶消化法依舊不可替代。
 

抗原熱修復(fù)是采用高溫、高壓方法配合合適的抗原修復(fù)液，使得被固定液封閉的抗原位點(diǎn)重新暴露，提高抗體的陽性檢出率。
 

最常用的抗原修復(fù)液有兩種：檸檬酸鈉緩沖液（pH=6）、EDTA緩沖液（pH=8或9），一般來說一抗的說明書都會(huì)寫明需要選擇哪種修復(fù)液。如果說明書沒有推薦，檸檬酸鈉緩沖液能夠適配大部分的抗體，EDTA緩沖液相對(duì)修復(fù)效果更強(qiáng)，但陽性增強(qiáng)的同時(shí)也會(huì)提高非特異背景，一些比較難表達(dá)的抗體可以選擇EDTA緩沖液。
 

小愛溫馨提示，沒有哪一種抗原修復(fù)液或者修復(fù)方法能夠適配所有的抗體和樣本，最佳條件還是需要在摸索實(shí)踐中確定哦！