三陰乳腺癌(TNBC)缺乏表達雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR),或人類表皮生長因子受體2 (HER2),占所有確診乳腺癌的10-15%, 且預后差，5年內復發風險高。PD-L1是患者選擇免疫治療的重要生物標志物，TNBC腫瘤免疫微環境(TIME)中PD-L1表達細胞的詳細空間特征可能會進一步加深我們對不同PD-L1+細胞表型的重要貢獻，及其與結果關聯的理解。

多重免疫熒光(mIF)代表了一種先進的檢測方式，使用獨特的光譜成像技術識別腫瘤免疫微環境的多標記免疫表型，為深入研究腫瘤微環境中的空間特征提供了可能性。大量轉化醫學研究者也對其方法學的可靠性和穩定性進行了驗證，證實了多色免疫熒光和免疫組織化學(IHC)技術定量的一致性。[1,2]

Yeong 等人[1]對比了使用傳統IHC定量PD-L1表達和多色免疫熒光下PD-L1的定量一致性，證實了mIHC/IF同時檢測和量化多個抗體克隆的PD-L1標記，并允許準確評估腫瘤和免疫細胞,是一種非常有前景的臨床研究工具。

用mIHC/IF標記的TNBC組織切片的代表性圖像

來自澳大利亞的Millar教授團隊[3]進一步研究了TNBC患者中表達PD-L1的免疫細胞的表型，并確定它們與總生存期(OS)和乳腺癌特異性生存期(BCSS)的關系。研究中收集了來自悉尼圣喬治醫院(n = 244)的TNBC患者樣本進行了回顧性研究，使用基于Akoya Biosciences Vectra Polaris™平臺的多重免疫熒光(mIF)技術評估CD3、CD8、CD20、CD68、PD-1、PD-L1、FOXP3和泛細胞角蛋白(pan-CK)及DAPI的9色熒光染色，使用InForm 軟件進行了光譜拆分和樣本自發熒光的去除，使用QuPath進行定量分析。

CD3、CD8、CD20、CD68、PD-1、PD-L1、FOXP3、泛細胞角蛋白(pan-CK)和DAPI的9色染色和HE的對比。

9色免疫熒光的詳細染色方案

統計分析顯示對比整體群體，在接受化療的病人 (HR 0.56, 95% CI 0.33–0.95, p = 0.030)中，高CD68+ PD-L1+基質細胞計數與改善預后相關。尤其是在乳腺癌特異性生存期的預測上，可以顯著提供僅使用PD-L1單一數據預測的準確性(HR 0.47, 95% CI 0.25–0.88, p = 0.018)。

統計分析生存率發現對比使用PD-L1，高表達的CD68+ PD-L1+ 巨噬細胞數量可以有效提供預后預測的準確性。CD68+ PD-L1+的定量分析可以為臨床治療提供有用的預后信息，以識別預后良好或不良的患者亞組。

綜上，使用9色免疫熒光染色，準確識別T細胞、B細胞、巨噬細胞和腫瘤細胞，并對其PD-1/PD-L1表達進行分析。間質中的大量雙染色CD68+ PD-L1+巨噬細胞，可以有效區分TNBC患者的一個亞組，輔助改善該亞組的預后，提高僅使用PD-L1+對BCSS的預測的準確性。這種預后免疫表型為進一步分層TNBC預后提供了有用的數據，為治療方案提供參考。

什么是Phenoptics解決方案？

Phenoptics解決方案，采用特色的MOTiF™ 快速全組織片掃描，是我們擁有專利和經過驗證的新一代多光譜成像技術。采用Phenoptics流線型的工作流程，可以幫助您比以往更好地理解驅動疾病的生物學。您能夠識別更多的細胞表型，評估它們的功能狀態，通過細胞與細胞的相互作用及宏觀組織結構的分析，描繪整個組織切片的空間關系。

[參考文獻]
1.  Yeong J, et al.Multiplex immunohistochemistry/immunofluorescence (mIHC/IF) for PD-L1 testing in triple-negative breast cancer: a translational assay compared with conventional IHC. Journal of Clinical Pathology 2020;73:557-562.
2.  Lu S, et al. Comparison of Biomarker Modalities for Predicting Response to PD-1/PD-L1 Checkpoint Blockade: A Systematic Review and Meta-analysis. JAMA Oncol. 2019;5(8):1195–1204. doi:10.1001/jamaoncol.2019.1549
3.  Wang, J., et al. Multiplexed immunofluorescence identifies high stromal CD68+PD-L1+ macrophages as a predictor of improved survival in triple negative breast cancer. Sci Rep 11, 21608 (2021). https://doi.org/10.1038/s41598-021-01116-6