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DNA片段中的分子計數法及其應用實例

瀏覽次數:3093 發(fā)布日期:2021-12-8  來源:http://www.bioalpha2008.com/product/swzysy.html

實驗室數學在生物學實驗數據分析中一直是一個令人頭疼的問題?在定量PCR實驗中,常常會遇到計算 DNA 片段中的分子、計算溶液的濃度或計算連續(xù)稀釋等,這樣的計算有沒有什么好的方法呢?
當然有了,在本文中,我們將教你簡單的 DNA 樣本中的分子計數法。


——例如,套入公式即可一招輕松拆解:500 ng 樣本中有多少個 50 堿基對 (bp) 片段的模板 /副本?這樣的棘手問題。使您很快就會成為實驗室中的計算高手!


一、計算 DNA片段中分子數量的應用
在進行以下類型的實驗時,通常需要DNA分子的計算:
DNA 連接。
生化分析。
實時 PCR(絕對定量)。
測量載體基因組的數量。

二、分子數計算公式的原理
我們知道,單個 DNA bp 的平均重量為 650 道爾頓。這也可以寫為 650 g/mol(= 摩爾質量)。因此,任何雙鏈 DNA 片段的分子量或摩爾質量都可以通過將其長度(以 bp 為單位)乘以 650來計算,答案將表示為道爾頓或 g/mol。
只要我們知道序列長度(即基因組的長度/大小),此計算將適用于任何物種的基因組 DNA。

三、實例與應用:
1.實例問題: 5.2-kb 質粒的分子量是多少?記住 5.2 kb = 5200 bp
計算: 5200 bp x 650 道爾頓 = 3,380,000 道爾頓或 g/mol
現在我們知道如何計算 DNA 模板的分子量了。使用阿伏伽德羅數,即 6.022 x 10 23分子/摩爾,可以使用以下公式計算每份模板的分子數:
計數
2.實例問題:您有 300 ng 的 5.2-kb 質粒。你的質粒有多少 拷貝?
分數 
 
3.實例問題:您有 50 ng 的 20-bp 引物。你的引物有多少份?
引物份數
4.實例問題:您有 150 ng 的 670 bp 純化 PCR 產物,你有多少份 PCR 產物?
 
注意:此公式基于您使用的是單一 DNA 物種的假設,因此在應用于 PCR 產物或質粒時,請確保您只有 1 個條帶或您有干凈的質粒小量制備。
所以實驗中,只要知道 DNA 片段的長度和以納克為單位的濃度,您就可以輕松應用該公式來獲得任何類型的 DNA 樣本中的拷貝數。

四、其他分子量計算常用的公式
分子量計算
DNA分子量計算
如果您有關于DNA片段計數 、PCR實驗等相關問題,請進入蘇州阿爾法生物官網與我們聯(lián)系。

發(fā)布者:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
聯(lián)系電話:0512-62956104
E-mail:jie_wu@bioalpha.cn

標簽: DNA片段 定量PCR
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