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艾狄斯25羥基維生素D酶聯(lián)免疫檢測試劑盒操作要點(diǎn)

瀏覽次數(shù):3406 發(fā)布日期:2010-7-22  來源:廣州固康

艾狄斯25羥基維生素D酶 聯(lián)免疫檢測試劑盒
(25-OH-VD)檢測步驟

         要點(diǎn)和解釋
檢測前將所有試劑平衡至室溫,小心混勻。
 
按照“試劑準(zhǔn)備”中所述,復(fù)溶或準(zhǔn)備相關(guān)試劑。
 
1. 準(zhǔn)備已作標(biāo)記的玻璃試管或聚丙烯管用以標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本的稀釋。
 
2. 標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本各取25μl分別加入到相應(yīng)標(biāo)記的試管。
 
3. 所有試管都再加入1ml的25D生物素。用漩渦混合器混合10秒。
 
4. 各取200μl已稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品或樣本分別加入已包被抗體的相應(yīng)酶標(biāo)板微孔內(nèi),做雙孔。用封口膜密封酶標(biāo)板,于18-25℃下孵育2小時(shí)。
 
5. 用稀釋好的洗液洗板3次。
a) 自動(dòng)洗板:設(shè)置洗板機(jī)分配每孔至少300μl洗液。注滿后抽空,如此循環(huán)3次。
b) 手動(dòng)洗板:迅速顛倒倒出孔內(nèi)物。每孔加入250μl洗液。再重復(fù)洗板2次。
在進(jìn)入下一步之前,于吸水紙上用力拍打倒置的板以除去多余的洗液 。
 
6. 用多道移液器向所有微孔內(nèi)加入200μl酶結(jié)合物。用封口膜密封酶標(biāo)板,于18-25℃下孵育30分鐘。
 
7. 重復(fù)步驟5。
 
8. 用多道移液器向所有微孔內(nèi)加入200μl TMB底物,用封口膜密封酶標(biāo)板,于18-25℃下孵育30分鐘。
 
 
 
9. 用多道移液器向所有微孔內(nèi)加入100μ終止液。
 
10. 加入終止液后的30分鐘內(nèi)在酶標(biāo)儀450nm(參考650nm)波長處測量吸光度。
 
 
  • 置于室溫下至少30分鐘,直到平衡至室溫。
  • 輕輕地反復(fù)顛倒混勻。

  • 確保使用前試劑完全復(fù)溶。
  • 確保所用試管為硼硅酸鹽玻璃試管或聚丙烯管,不能使用聚苯乙烯管因?yàn)槠淇梢鸾Y(jié)果偏低。
  • 將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本直接加入到試管底部,不要粘到側(cè)壁上。
  • 使用移液槍時(shí),沿試管壁加入避免濺出。
  • 充分混勻10秒。
  • 加樣時(shí)確保不接觸到酶標(biāo)板微孔底部。
  • 加樣時(shí)不要距離微孔太高,避免濺出。
  • 確保孵育時(shí)間剛好。

  • 確保每孔分配合適體積的洗液。
  • 避免微孔內(nèi)產(chǎn)生氣泡。
  • 洗板后快速輕打酶標(biāo)板以除去殘留洗液。

  • 使用多道移液器時(shí)確保每個(gè)吸嘴吸取的試劑量相同。
  • 使用新的稱重盤放置試劑瓶,防止污染。
  • 確保每孔內(nèi)分配的試劑量準(zhǔn)確。
  • 確保每個(gè)孔都已密封。
  • 確保孵育時(shí)間剛好。
  • TMB底物對光敏感且易受污染。僅移取檢測所需要的量,丟棄沒用完的TMB底物,請勿再倒回瓶內(nèi)。
  • 確保酶標(biāo)儀已設(shè)置為正確的波長。.
  • 加入終止液后30分鐘內(nèi)讀數(shù)。
 

發(fā)布者:廣州固康生物科技有限公司
聯(lián)系電話:020-32293176 400-889-1566
E-mail:sales@gucon.com

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