根據國家標準,生活飲用水中不應含有病原微生物； 生活飲用水應對微生物的幾個指標總大腸菌群、大腸埃希氏菌、菌落總數。其中菌落總數不能超過100個ＣＦＵ／ｍＬ），總大腸菌群限值為不應檢出。本方案利用多管發酵法，快速分裝乳糖蛋白胨培養液達到檢測出生活飲用水中的總大腸菌群數量。
 
方案詳情：

• 實驗原理

經36℃±1℃培養24H，發酵乳糖產酸產氣、經證實試驗和革蘭氏染色檢測水中總大腸菌群的方法。
二、實驗準備
1、培養基和試劑
① 乳糖蛋白胨培養液
② 二倍濃縮乳糖蛋白胨培養液
③ 伊紅美藍培養基
④ 革蘭氏染色液
2、儀器與設備
① 培養箱：36℃±1℃
② 冰箱
③ 電子天平
④ 顯微鏡
⑤ 平皿：直徑9CM
⑥ 試管
⑦ 無菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）FDT-SP01001
⑧ 無菌吸管：10 mL（具0.1 mL刻度）FDT-SP01010
⑨ 手動移液器：fluidot  1 mL  MSP1K
⑩ 電動移液器：fluidot   5 mL  FDT-1-1-5000
⑪錐形瓶
⑫小倒管
⑬載玻片
⑭吸頭：1.5mL   FDT-1500-1-TSF
⑮滅菌平皿：fluidot  FDT-9CM-2-S，直徑90 mm。
⑯自動液體分裝儀：fluidot  30001-PP
 
三、實驗步驟
1、乳糖發酵實驗
 
① 用無菌吸管或移波器吸取10mL水樣接種到10mL雙料乳糖蛋白胨培養液中,取1ml 水樣接種到10ml,單料乳糖蛋白陳培養液中,另取1ml,水樣注人到9m
② 檢驗水源水時,如污染較嚴重,應加大稀釋度,可接種1mL、0.1mL、0.01 ml,甚至 0.1 mL、0.01mL、0.001mL,每個稀釋度接種5管單料乳糖蛋白胨培養液,每個水樣共接種15管。接種1mL以下水樣時,應作 10倍遞增稀釋后,取1ml,接種,每遞增稀釋一次,換用1支1 mL,無菌吸管。
③ 將接種管置于36℃士1℃培養箱內,培養24h士2h,如所有乳糖蛋白胨培養管都不產氣產酸,則可報告為總大腸菌群未檢出,如有產酸產氣者,則按下列步驟進行。
 
 
 
2、分離培養
將產酸產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,于36℃士1℃培養箱內培養18h~24h，觀察菌落形態,挑取符合下列特征的菌落進行革蘭氏染色鏡檢:
----深紫黑色、具有金屬光澤的菌落;
----紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落;
----淡紫紅色、中心較深的菌落

1. 證實試驗

經上述染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌,同時接種乳糖蛋白陳培養液,置36℃士1℃培養箱中培養24h士2h,有產酸產氣者,即證實有總大腸菌群存在。

• 實驗數據處理

根據證實為總大腸菌群陽性的管數,查MPN表(見表3和表4),報告每100ml 水樣中的總大腸菌群 MPN值。稀釋樣品查表后所得結果應乘稀釋倍數。如所有乳糖發酵管均為陰性時,可報告總大腸菌群未檢出。