1、樣本處理
如是-20°C冷凍保存的樣本，有實(shí)驗(yàn)安排時提前拿出血樣，解凍至室溫，過冷或結(jié)塊會影響裂解效果。

2、裂解結(jié)合
在裂解過程中，要按照說明書上進(jìn)行操作，不同的上樣量對應(yīng)不同的試劑體系，上樣量過多過少都會影響裂解的效果。以領(lǐng)駿生物開發(fā)的全血基因組DNA提取試劑（磁珠法）為例，上樣量為200ul，配合的裂解液用量為400ul，這樣的搭配為最佳。無論是手工操作還是上機(jī)，不可避免有人為因素，加樣過程中就要統(tǒng)一動作、快速并準(zhǔn)確加樣，以此減少誤差。由于有些客戶的實(shí)驗(yàn)，需要高產(chǎn)量，他們就會慣性的認(rèn)為，等比例加大試劑就可以。其實(shí)是不是這樣的，在實(shí)際操作中，不能簡單的放大裂解體系，需要根據(jù)裂解液對樣品裂解效率進(jìn)行優(yōu)化，將上樣體積濃縮后，才可進(jìn)行磁珠法操作流程的優(yōu)化。

3、洗滌
樣本經(jīng)過裂解之后，在洗滌過程中，磁珠結(jié)團(tuán)是經(jīng)常遇到的現(xiàn)象，尤其手工操作時，這是由磁珠本身特性和磁珠所處試劑環(huán)境兩方面造成的，有些磁珠不僅在全血DNA提取過程中會結(jié)團(tuán)，其他的樣本也同樣會結(jié)團(tuán)，其實(shí)結(jié)團(tuán)現(xiàn)象可以用來提前預(yù)判實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)團(tuán)往往是吸附了大量核酸，如果哪次實(shí)驗(yàn)沒有結(jié)團(tuán)，本次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果或許會不太好，不過也不能一概而論，雜質(zhì)太多也是引起磁珠結(jié)團(tuán)的原因。通過修改試劑配方，優(yōu)化試劑用量，可以改善磁珠的結(jié)團(tuán)現(xiàn)象，這就需要對各種參數(shù)進(jìn)行調(diào)整。

4、洗脫
得率是影響下游實(shí)驗(yàn)的最直接因素，根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)，200ul的全血，得率一般在10ug以上，但是有時實(shí)驗(yàn)的結(jié)果只有2ug左右，甚至更低，這樣的結(jié)果可能是兩方面導(dǎo)致的，第一是裂解，第二是洗脫。若是裂解過程的問題，可能是裂解不充分，在洗滌的時候上清液顏色會發(fā)黃、發(fā)紅，這種情況下，可以提高裂解溫度，或者增加裂解液使用量。洗脫環(huán)節(jié)的問題，經(jīng)常表現(xiàn)為結(jié)團(tuán)的磁珠未被打散，或有掛壁現(xiàn)象，磁珠有滯留，從而減少了核酸的含量，可考慮加大震蕩力度，或用槍頭吹吸解決。
 
【實(shí)驗(yàn)案例】
案例1：
同一批次試劑提取不同健康人新鮮血樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

樣本序號	樣本	A260/A280	A260/A230	Conc.(ng/µL)
1	1號血樣	1.80	1.89	75.7
2	2號血樣	1.89	1.89	73.9
3	3號血樣	1.83	1.93	68.2
4	4號血樣	1.82	1.90	67.9
5	5號血樣	1.84	1.99	59.1

電泳圖如下：

結(jié)果分析：試劑的提取效果很好（提取產(chǎn)物純度好、濃度高、電泳條帶完整）

案例2：
不同批次試劑提取同一豬血樣本的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

試劑批號	A260/A280	A260/A230	Conc.(ng/µL)
批次1	1.87	1.90	157.5
批次1	1.87	1.96	137.9
平均值	1.87	1.93	147.7
批次2	1.88	1.92	132.6
批次2	1.88	1.99	140.4
平均值	1.88	1.96	136.5
批次3	1.89	1.95	141.2
批次3	1.89	1.91	141.7
平均值	1.89	1.93	141.4

結(jié)果分析：由上圖可以看出，提取試劑批次間差異小。